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研究目的:肝癌（主要指肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC））是中国常见的恶性肿瘤之一,其死亡率排名第三,导致了约90万病例和83万死亡病例,给中国人民的生命和健康造成了重大威胁。泛素化是细胞内重要的翻译后修饰过程之一,其通过泛素激活酶E1（Ubiquitin-activating enzyme E1,E1酶）、泛素结合酶E2（Ubiquitin-conjugating enzyme E2,E2酶）和泛素连接酶E3（Ubiquitin ligase enzymes E3,E3酶）组成的酶促级联反应方式,将蛋白质底物泛素化并降解。多项研究表明,泛素化过程参与了多种生理和病理过程,包括肿瘤的发生和发展。缺氧（Hypoxia）普遍存在于人类实体瘤中,是肿瘤恶性进展的关键驱动因素。缺氧诱导因子-1α（Hypoxia-inducible factors-1α,HIF-1α）在细胞缺氧反应中上调,同时也调节着癌细胞的生长、迁移等恶性行为。近期研究表明,缺氧和泛素化之间的联系在肿瘤领域中具有重要作用,多种缺氧反应性泛素化酶已被发现并得到了研究。本研究旨在探究缺氧对泛素结合酶E2-K（Ubiquitin-conjugating enzyme E2K,UBE2K）在HCC中所扮演的作用,并研究UBE2K对HCC细胞增殖和迁移的影响。这些研究结果突出了UBE2K作为HCC新的生物标志物和治疗靶点的潜在应用,为未来HCC早期诊断与治疗策略的开发和优化提供了重要的科学依据。研究方法:（1）通过基因微阵列分析发现缺氧条件下UBE2K水平升高。（2）免疫印迹（Western blotting,WB）确定在缺氧和常氧状态下Hep3B和Huh7细胞中UBE2K的表达水平。（3）构建稳定敲低和过表达HIF-1α的Hep3B和Huh7细胞稳转株。（4）通过WB确定缺氧状态下和过表达HIF-1α条件下Hep3B和Huh7细胞中UBE2K的表达水平变化。（5）缺氧状态下,在Hep3B和Huh7细胞中稳定敲低HIF-1α,通过WB检测UBE2K的变化。（6）通过免疫组织化学（Immunohistochemistry,IHC）染色和生物信息学分析HCC组织中UBE2K与HIF-1α的表达相关性。（7）IHC染色和生物信息学分析发现UBE2K在HCC组织中高表达。（8）通过WB方法检测,比较了正常肝细胞株MIHA和肝癌细胞株MHCC97H、Huh7、Hep3B中UBE2K表达水平的差异。（9）我们构建了稳定转染UBE2K敲低和过表达的Hep3B和Huh7细胞系。（10）使用CCK-8增殖实验和克隆形成实验,评估了敲低和过表达UBE2K对Huh7和Hep3B细胞增殖能力的影响。（11）我们使用Transwell迁移实验和划痕实验来研究敲低和过表达UBE2K对Huh7和Hep3B细胞迁移能力的影响。（12）WB,CCK-8,克隆平板,Transwell和划痕实验发现UBE2K的敲低抑制了HCC细胞中缺氧诱导的细胞增殖和迁移。（13）WB,CCK-8,克隆平板,Transwell和划痕实验表明提高UBE2K水平可以逆转缺氧状态下因敲低HIF-1α引起的细胞增殖和迁移抑制。结果:在HCC细胞中,UBE2K是潜在的缺氧反应基因。我们的研究表明,缺氧诱导HIF-1α表达可促进UBE2K表达;而在缺氧条件下,敲低HIF-1α可降低UBE2K表达。基于IHC染色和生物信息学分析证实,与癌旁组织相比,UBE2K在HCC组织中高表达;在HCC组织中UBE2K与HIF-1α的表达呈正相关。进一步的功能性研究发现UBE2K过表达可促进Hep3B和Huh7细胞的增殖与迁移。相反,UBE2K敲低可抑制Hep3B和Huh7细胞的增殖和迁移。此外,功能性逆转实验证明,敲低UBE2K可抑制HCC细胞中缺氧诱导的细胞增殖和迁移。相反,过表达UBE2K可逆转缺氧状态下因敲低HIF-1α引起的对细胞增殖和迁移的抑制。结论:（1）UBE2K是一个缺氧反应基因,在缺氧条件下HIF-1α正向调控UBE2K的表达。（2）UBE2K在HCC中表达增加,并与HIF-1α的表达呈正相关。（3）UBE2K作为一种促癌基因,可促进HCC细胞的增殖和迁移能力。（4）HIF-1α与UBE2K形成功能性的HIF-1α/UBE2K轴,促进HCC细胞在缺氧条件下的生长和迁移。意义:我们的研究首次揭示了UBE2K作为一个新的缺氧反应基因在HCC中发挥促癌作用和潜在的分子机制。这一研究成果提供了一种全新的角度,有助于更深入地了解HCC的发生和发展。