偏头痛是一种中枢神经系统（central nervous system，CNS）功能紊乱性疾病，严重影响患者生活质量和工作。目前偏头痛的发病机制目前尚未完全明了。随着神经生物、分子药理学的发展及脑成像技术的应用，中枢高敏感性在偏头痛发作中的作用为人们所重视。目前有许多研究在脊髓水平上表明了外周炎症性疼痛、神经源性疼痛所致中枢高敏感性由PKC-NMDAR环路介导。 蛋白激酶C（PKC）为丝氨酸/苏氨酸激酶大家族成员，是一类Ca2+、磷脂依赖性磷酸化酶，作为一种胞内第二信使，PKC在神经元兴奋性的调制、信号传导、神经递质的释放、突触可塑性等中起重要作用。其中PKCγ亚单位为脑、脊髓所独有，在疼痛信号处理及中枢敏感化诱导和维持中起重要作用。 N-甲基-D-天冬氨酸受体（NMDAR）是中枢神经系统中兴奋性递质谷氨酸受体的一种类型，属于离子型受体。NMDAR有NR1，NR2，NR3等三种亚单位，NMDAR是由NR1和NR2或NR3组成的异聚体，其中NR1是必需的组分，NR2，NR3则修饰了整个受体的功能特性。它涉及了体内许多复杂的生理和病理过程，包括wind-up，中枢敏化、长时程增强、外周敏化和内脏疼痛、细胞坏死和凋亡，除此以外，还参与了痛觉过敏的产生和维持。 研究表明，当兴奋性冲动传来时，突触前膜释放大量的兴奋性氨基酸（EAAs），使突触后膜产生快EPSP，导致NMDAR通道内的阻止Ca2+内流的Mg2+移开，Ca2+得以内流，激活了胞内Ca2+依赖的PKC，促使PKC的膜转位，磷酸化胞膜上的NMDAR相关的离子通道，减少Mg2+对NMDAR通道的阻断作用，最终使NMDAR活性增高、更多的Ca2+内流入胞，进一步增强PKC活性及其对NMDAR通道的效应，这一PKC-NMDAR正反馈环路在中枢敏感化中具有重要作用。 氟桂利嗪是一种长效的钙离子拮抗剂，被公认为是预防偏头痛的一线药物。临床双盲对照研究表明，该药可以有效减少偏头痛发作的频率及头痛的严重程度，但氟桂利嗪预防偏头痛发作的机制目前不明。 目的： 本研究将从PKCγ、NMDAR1、磷酸化NMDAR1着手，首先建立硝酸甘油型实验性偏头痛大鼠模型，并同步设立生理盐水对照组及氟桂利嗪干预组，检测脑干组织中上述各物质mRNA及其蛋白的表达，并比较它们在发作期与间歇期的表达变化，以初步探讨PKGγ、NMDAR1、磷酸化NMDAR1在偏头痛发病机制中的作用。 方法 1.动物分组及处理：采用清洁级成年雌性Sprague-Dawley（SD）大鼠为实验对象，随机分为3组。模型组：依Tassorelli法皮下注射硝酸甘油10mg/kg，每周1次，共5周，制作实验性偏头痛大鼠模型，并于第二次造模后给予生理盐水10ml/kg/d灌胃，共4周；对照组：与模型组同步对照，以生理盐水代替硝酸甘油皮下注射；干预组：自硝酸甘油第二次造模后，给予氟桂利嗪5mg/kg/d灌胃，共4周。 2.受试动物于第5次造模后2小时（发作期）或第4天（间歇期）分别断头处死，取大鼠脑干组织，液氮内保存。 3.RT-PCR法半定量检测大鼠脑干组织PKCγ、NMDAR1mRNA的表达。 4.Western-Blot法检测大鼠脑干组织PKCγ、NMDAR1、磷酸化NMDAR1蛋白的表达。 结果 1.与对照组相比，在偏头痛发作期及间歇期，模型组和干预组大鼠的脑干组织中PKCγmRNA及蛋白的表达无变化（p>0.05）； 2.与对照组相比，在偏头痛发作期及间歇期，模型组和干预组大鼠的脑干组织中NMDAR1mRNA及非磷酸化蛋白的表达无变化（p>0.05）； 3.与对照组相比，模型组磷酸化NMDAR1蛋白的表达明显上调（p<0.05），干预组也稍有上调，但无统计学意义（p>0.05）；模型组发作期与间歇期之间，干预组发作期和间歇期之间，磷酸化NMDAR1蛋白的表达均无明显变化（p>0.05）。 结论 1、偏头痛的发生发展可能与PKCγ依赖的磷酸化NMDAR1蛋白表达的上调有关。而可能与PKCγmRNA及蛋白、NMDAR1mRNA及蛋白（非磷酸化）的表达量无关。 2、氟桂利嗪预防偏头痛发作的机制之一可能是打断了PKC-NMDAR这一正反馈环路的恶性循环。