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樟子松(P.sylvestris Var Mongolica)具有根系发达,耐寒,耐旱,喜光,砂质土,材质优良,土壤适应性强,成长快等特点,是优良针叶用材和防风固沙树种。但人们普遍认为樟子松育苗技术难度大,无性繁殖困难,且结实间隔期长,籽粒空鳖率高,种子园种子不能很快满足生产上的需要。当前,组织培养技术为良种快繁提供了一条有效的途径。因此,对樟子松组织培养及快繁技术的研究具有一定的理论与实践意义。目前国内外有关樟子松组织培养研究的报道极少,且都是初步的。本研究通过对樟子松的组织培养及微体快繁技术的研究,在离体条件下,以樟子松沙藏成熟胚为外植体获得了再生小植株,初步探索了樟子松微体快繁的有效途径,为其工厂化育苗提供了一定的试验和理论基础。同时为进一步通过遗传操作获得转基因植株,改良松树品种提供必要前提和条件。本试验获得了以下主要结论: 1 不定芽诱导试验 1.1 樟子松组织培养最佳的外植体为经低温(5℃)沙藏3 周的樟子松成熟种胚,其中种子与湿沙(含水量为沙子最大持水量的60%)比例为1 :3。 1.2 在樟子松沙藏成熟胚培养的过程中,将去除种皮的种子经70%的乙醇消毒40s 后,再用0.1%HgCl2消毒5-6min 时较为适宜,污染率与死亡率相对而言都处于较低水平。 1.3 适宜樟子松组织培养不定芽诱导与分化的基本培养基为1/2MS。 1.4 将经过沙藏的樟子松成熟种胚水平放置在培养基上时,更有利于胚的萌发与生长,子叶上不定芽的分化和诱导,比将种胚直立或倾斜放置效果要好。 2.不定芽扩大繁殖的研究 2.1 胚直接诱导产生不定芽的研究 2.1.1 适合樟子松胚直接诱导芽增殖的生长素为IBA0.05～0.1 mg·L-1 ,NAA0.1～0.2 mg·L-1,细胞分裂素为6-BA1.0～2.0mg·L-1。 2.1.2 6-BA 与NAA 组合时,樟子松胚直接诱导扩大繁殖的最优培养基为1/2MS+1.0 mg·L-16-BA+0.2 mg·L-1NAA+3%蔗糖的培养基。 2.1.3 6-BA 与IBA 组合时,樟子松胚直接诱导扩大繁殖的最优培养基为1/2MS+1.0 mg·L-16-BA+0.1mg·L-1IBA+3%蔗糖的培养基。