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目的:在临床上,由外伤或疾病引起的关节软骨损伤很常见,多为成年人和老年人,尤其是骨关节炎病,在老年人中更为常见。由于软骨组织中不具有血管与神经,其损伤后难以自我恢复。区别以往的实验研究对象大多为动物或者人胚胎的关节软骨细胞,我们以成人关节软骨细胞为研究对象,在人参皂甙Rg1的单独作用下,通过细胞形态学、细胞计数、Ⅱ型胶原免疫组化等观察检测手段,了解单独应用人参皂甙Rg1对其增殖的促进作用,并于培养第七天用ELISA法测定碱性成纤维样生长因子(bFGF)的表达,为研究人参皂甙Rg1对成人关节软骨的体外培养扩增机制提供理论依据。 方法:①成人关节软骨分离、培养。②倒置显微镜下观察软骨细胞生长状况,并对培养的1至4代的软骨细胞进行细胞计数,绘制生长曲线。③细胞计数绘制生长曲线,观察在人参皂甙Rg1作用下软骨细胞的增殖情况。④倒置显微镜下观察人参皂甙Rg1作用下软骨细胞形态学改变。⑤免疫组织化学法观察人参皂甙Rg1对软骨细胞Ⅱ型胶原表达的影响。⑥用ELISA法测定细胞上清液,全细胞,裂解细胞上清液及裂解细胞的bFGF表达。⑦采用独立样本t检验、单因素方差分析及重复测量因素方差分析,应用SPSS13.0统计学软件进行统计学分析。 结果:①原代关节软骨细胞接种6小时后开始贴壁,培养72小时后大部分细胞贴壁,形态由球形逐渐向外伸展出突起而转变为多边形。随着细胞增殖数量增加,体积逐渐增大,细胞形态也慢慢趋于一致。②实验细胞接种后出现潜伏期,对照组自第3天起细胞也进入对数增殖期,到第7天细胞数约为接种时的8倍。药物组自第2天~3天起细胞增殖能力增强,到第7天细胞数约为接种时的15倍,明显高于对照组(P=0.00<0.05)。所以我们认为,人参皂甙Rg1对软骨细胞的增殖具有促进作用。③免疫组织化学结果显示:药物组和对照组均可见Ⅱ型胶原表达,胞浆染成棕色,细胞接触部分可见较浅棕色。药物组与对照组没有统计学差异(P=0.625、0.800>0.05)。④ELISA法测定药物组细胞上清液,全细胞,裂解细胞上清液及裂解细胞的bFGF表达均明显高于对照组(P<0.05)。 结论:我们将成年人的关节软骨细胞成功培养成活,并通过倒置显微镜观察细胞形态的变化,对细胞进行计数并绘制生长曲线,证明单独应用人参皂甙Rg1对体外培养的成人关节软骨细胞有明显的促进增殖的作用,并上调细胞bFGF的表达。