近年来，表型遗传改变与肿瘤之间的关系成为研究的热点之一。表型遗传改变不同于基因遗传改变，表型遗传改变不改变基因的序列，仅对基因进行修饰，而且这种修饰是可以逆转的。表型遗传修饰是基因表达调控的重要形式，其主要内容是DNA甲基化及组蛋白修饰。在肿瘤细胞中DNA甲基化主要指抑癌基因CpG岛的异常甲基化，这种异常甲基化抑制基因转录，使抑癌基因丧失抑癌作用。DNA甲基转移酶抑制剂能够去除异常的甲基化修饰，使抑癌基因恢复活性，发挥抑癌作用。死亡相关蛋白激酶1(death-associated protein kinasel, DAP-kinasel)为细胞凋亡正调控因子。作为一种抑癌基因，DAP-kinasel在B细胞源性淋巴瘤、甲状腺淋巴瘤、胃癌等多种肿瘤中表达缺失，其失表达的主要原因，目前认为与其CpG岛的异常甲基化状态有关。 为了解DAP-kinasel的甲基化状态在宫颈癌发生、发展过程中的意义，我们从以下几个方面研究： 1．宫颈癌细胞DAP-kinasel基因CpG岛甲基化的检测 本研究应用甲基化特异性PCR(MSP)和免疫组化方法，对32例宫颈癌组织中DAP-kinasel基因的CpG岛甲基化修饰及蛋白表达进行检测，32例宫颈癌组织中包括18例宫颈鳞癌组织及14例宫颈腺癌组织。结果显示，18例宫颈鳞癌组织中11例有甲基化 第四军医大学博十学位论文扩增，，15例中DAP一kinasel基因表达的蛋白为阴性。14例宫颈腺癌组织7例存在甲基化扩增，12例DAP一kinasel基因表达的蛋白为阴性，而正常宫颈组织无甲基化扩增，且蛋白表达均为阳性。上述结果提示，宫颈癌中DAP一kinasel基因的CpG岛有异常甲基化修饰，DAP一kinasel蛋白表达下降，而CpG岛异常甲基化修饰，可能是DAP一kinasel蛋白失表达的原因之一，这表明DAP一kinasel基因的CpG岛异常甲基化修饰是宫颈细胞癌变的一个重要原因之一。2.5一氮胞昔对宫颈癌细胞系DAP一kinasel异常甲基化的影响 DNA甲基转移酶抑制剂5一氮胞营能使多种异常甲基化沉寂的基因重新被激活，恢复功能。本研究采用MSP检测宫颈癌细胞SIHa和HeLa的DAP一kinasel甲基化修饰，采用RT.PCR及免疫组化方法检测不同浓度的5一氮胞昔对宫颈癌细胞SIHa和HeLaDAP一kinasel的mRNA及蛋白表达的影响。结果提示，SIHa细胞中DAP一kinasel有异常甲基化修饰，5一氮胞昔能使siHa细胞中甲基化的DAP一kinasel基因去甲基化，重新转录并翻译，并有一定的剂量依赖性。HeLa细胞中DAP一kinasel无异常甲基化修饰，5-氮胞昔也不影响D妙一kinasel的mRNA转录。3.5一氮胞昔与Y一干扰素协同诱导对宫颈癌细胞凋亡的影响 研究2结果表明，5一氮胞昔诱导能使宫颈癌细胞中甲基化的DAP一kinasel基因去甲基化，重新转录并翻译。本研究采用细胞生长曲线、DNA梯形条带、细胞凋亡检测，观察5一氮胞昔与Y-干扰素协同诱导、Y一干扰素诱导、5一氮胞昔诱导的宫颈癌细胞siHa的生长及凋亡。结果显示，单用5一氮胞昔诱导能抑制细胞生长，诱导细胞凋亡。5一氮胞普与干扰素协同其抑制细胞生长及诱导凋亡作用明显增强，优于单用Y一干扰素或5一氮胞昔组。上述结果提示，5一氮胞昔能诱导细胞凋亡，与Y一干扰素协同作用后其 第四军医大学博士学位论文诱导凋亡作用增强，其机制可能与再次激活的DAP一kinasel基因恢复凋亡正调控功能相关。 综上所述，宫颈癌细胞中D妙一kinasel基因的CpG岛异常甲基化修饰是细胞癌变的一个重要原因之一，D妙一kinasel基因的CpG岛高度甲基化修饰能抑制D妙一klnasel转录，使其蛋白失表达，失去其作为细胞凋亡的正调控功能，使细胞过度增殖，发生恶性转化。DNA甲基转移酶抑制剂5一氮胞昔使宫颈癌细胞siHa中的DAP一kinasel基因去甲基化，重新表达，恢复其功能，抑制SIHa细胞的生长，并执行Y一干扰素诱导的细胞凋亡。 本研究初步证实，DNA甲基转移酶抑制剂5一氮胞昔能够激活因甲基化失活的DAP一kinasel基因，恢复其作为凋亡正调正控因子的作用。这为宫颈癌的去甲基化治疗提供了依据。但是这种DNA甲基转移酶抑制剂的去甲基化作用是否具有靶向性还需我们进一步的研究。