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目的:研究局灶性脑挫裂伤后大脑皮质神经元形态变化,探讨川芎嗪、川芎嗪和尼莫地平联合用药对脑挫裂伤神经细胞凋亡相关基因Bcl-2mRNA表达的调控机制,
方法:采用Feeney自由落体撞击法建立急性局灶性脑挫裂伤动物模型。取80只Wistar成年大鼠随机分为6组。正常对照组(Normalcontrol,N);模型对照组(Modelcontrol,M);川芎嗪小剂量组(Tetramethylpyrazinecontrol,TMPI);川芎嗪大剂量组(Tetramethylpyrazinecontrol,TMPII);川芎嗪+尼莫地平小剂量组(TetramethylpyrazineandNimodipinecontrol,TANI);川芎嗪+尼莫地平大剂量组(TetramethylpyrazineandNimodipinecontrol,TANII);其中N、M组各10只,TMPI、TMPII、TANI、TANII每组各15只。TMPI组术前30min注射川芎嗪(0.36mg/100g),术后8h再次注射等剂量川芎嗪,TMPII组术前、后注射等剂量川芎嗪(0.72mg/100g),TANI组术前30min注射川芎嗪(0.36mg/100g),术后8h再次注射等剂量川芎嗪及尼莫地平(0.5mg/100g),TANII组术前注射川芎嗪(0.72mg/100g),术后注射等剂量川芎嗪及尼莫地平(1.0mg/100g)。术中无菌术将实验组大鼠右侧颅顶骨造骨窗,落体750g/cm2作用力,致右侧顶叶大脑皮质挫伤。N组不致伤不注药,M组致伤不注药。术后32h取材,常规石蜡切片和HE染色,原位杂交法检测Bcl-2mRNA,并进行图像分析。实验数据进行t检验。
结果:1N组:大鼠脑组织冠状切面左右对称。大脑皮质、胼胝体、纹状体等结构清晰,分界明显。大脑皮质神经元和神经胶质细胞分布有序,虽然皮质细胞分层界限不够清楚,但神经元和神经胶质细胞十分丰富,明显可见。尤其是星形和锥形神经元结构十分清晰,它们核大而圆,异染色质少,故胞核呈空泡状,核仁大而且嗜酸性;神经胶质细胞小,胞核着色较深。神经纤维纤细,在HE染色时不够明显。Bcl-2mRNA原位杂交染色可见阳性细胞少,着色浅。2M组:在皮质灶性出血和脑组织缺损区周边有大量积液而致脑组织呈疏松网状。神经元水肿胞质呈空泡明亮环状,胞核异染色质增多,嗜碱性增强,有些胞核固缩。此区细胞相对减少。灶周边以中心区向外约0.5mm处则见组织水肿减轻,但神经元仍有水肿现象,此区乃人们所说的“半暗带”。神经元具有可恢复性。Bcl-2mRNA阳性细胞数密度较正常组增多,着色较深,灰度值降低(p均<0.01)。3TMPI、TMPII组:HE染色切片上病灶区形态和模型组无显著差异。在“半暗带”神经元水肿明显减轻。神经元周围水肿带明显缩小。Bcl-2mRNA原位杂交阳性细胞增多,着色加深,灰度值降低。4TANI、TANII组:HE染色可见病灶中心仍有明显出血,灶周区水肿无明显减轻,而神经元胞质水肿明显好转。Bcl-2mRNA原位杂交阳性细胞明显增多,着色加深,灰度值降低(p均<0.01)。
结论:1脑损伤32h伤灶中心区出血,周边大量积液,脑组织疏松网状。伤灶周边以中心区向外约0.5mm处出现“半暗带”。2局灶性脑挫裂伤后Bcl-2mRNA阳性细胞明显增多,着色加深,灰度值降低。3不同剂量的川芎嗪及川芎嗪和尼莫地平联合均可上调Bcl-2mRNA的表达,抑制神经细胞凋亡,发挥脑保护作用。4川芎嗪和尼莫地平联合用药对皮质神经元的保护作用优于川芎嗪单一大、小剂量用药。