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伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)作为困扰我国养猪业的重要传染病病原之一。20世纪80年代开始,PRV相继地在全国各地爆发,且根据测序结果来看,我国流行的毒株与欧美等国家爆发流行的毒株不同,处于另外一个进化分支。猪一旦感染PRV后,便很难将其从体内清除,造成种猪的终身带毒,仔猪的倒地死亡,打击着我国的农业经济的发展。p53作为动物基因组的“守护者”,扮演着重要角色。p53基因,又称TP53基因,分子量大小约43.7Ku,受基因磷酸化调控。p53定位在猪的第12对染色体中,调控着细胞内各种生物信号的传递。p53基因拥有抗病毒的功能,病毒侵入机体后都能与p53发生相互作用。本研究以小鼠作为动物试验模型,为探索p53在PRV小鼠体内复制和致病性的作用,开展了如下试验:第一部分:PRVgB基因实时定量PCR检测方法的建立首先对本试验用的PRV病毒(Bartha株)的gB基因设计荧光定量PCR专用引物,扩增得到目的基因,并对其回收后T-A连接克隆至pMD19T载体,最后成功构建并鉴定了重组质粒pMD-gB。对构建的重组质粒倍比稀释后,利用SYBR Green染料法荧光定量PCR建立了扩增gB基因的标准曲线,曲线方程为:y=-3.8212x + 41.587、R2=0.9997,标曲的线性关系良好,能作为后续试验检测PRV病毒载量的方法。第二部分:p53影响小鼠体内PRV复制及致病力的研究在对小鼠攻毒前,先对所需的PRV病毒材料进行扩增培养和试验用的p53基因敲除c57BL/6小鼠进行鉴定。然后对野生型(WT)和p53敲除型(p53 KO)小鼠颅内注射1.0X 104TCID50滴度的PRV病毒,然后对两组小鼠做了脑部病毒基因载量和病毒滴度测定试验,存活率试验,组织病理切片的H.E染色观察,炎症因子的mRNA与抗体水平测定,结果发现p53基因的敲除能够降低PRV在小鼠体内的复制,并减弱其致病性。第三部分:PRV感染小鼠后脑组织的全基因转录组差异分析对WT小鼠和p53 KO小鼠攻毒后,收获其脑组织进行小鼠的全基因转录组差异分析,并对16个差异表达的基因采取定量PCR验证,确定了转录组数据的准确性。试验结果发现了 p53 KO小鼠在PRV攻毒后,干扰素相关、趋化因子相关的基因和其他抗病毒相关基因较WT小鼠都呈显著性的下调,并通过WT小鼠的接毒对照试验,说明了 p53 KO小鼠对PRV不易感,进一步验证了第二部分的结果。综上所述,本研究证明了 p53基因的缺失对PRV在小鼠体内复制与致病性起抑制作用。