论文部分内容阅读
目的:我们先前证明二烯丙基二硫(diallyl disulfide, DADS)可明显抑制人胃癌细胞增殖,并且蛋白质组学研究发现DADS诱导人胃癌MGC803细胞的差异蛋白质LIMK明显下调。近年来,LIMK1对肿瘤细胞的增殖和侵袭的意义引起了广泛关注。本研究旨在探讨DADS对人胃癌MGC803细胞LIMK1的表达及其信号通路的影响,以阐明其抗肿瘤细胞增殖、侵袭和转移的分子机制。方法:DADS作用人胃癌MGC803细胞后,采用MTT比色法检测对增殖影响; Transwell实验和划痕实验分别观察DADS对细胞侵袭和迁移能力的影响;免疫组化检测LIMK1的表达;RT-PCR、Western blot分别检测Rac1、Rock1、Pak1、LIMK1、cofilin1和Destrin的mRNA与蛋白表达。结果:1. DADS对人胃癌MGC803细胞的增殖、侵袭和迁移具有抑制作用MTT法检测结果显示,30 mg·L-1 DADS作用MGC803细胞24h、48h、72h、96h后,其吸光度值比对照组低,而且随时间增加逐渐降低(P<0.05);随着时间增加,DADS对癌细胞增殖的抑制率逐渐增加,依次为31.8%,66.1%,83.6%,89.2% (P<0.05),表明DADS对人胃癌细胞具有明显的生长抑制作用,且呈显著的时间-效应依赖关系(P<0.05)。划痕实验结果显示,10、20、30、40、50 mg·L-1 DADS分别作用MGC803细胞,取0小时和24小时观察划痕愈合情况,对照组划痕愈合显著快于DADS处理组,证明细胞的迁移能力被抑制,呈剂量-效应依赖关系(P<0.05)。Transwell实验结果显示,10、20、30、40、50 mg·L-1 DADS分别作用MGC803细胞24h后,随机取10个高倍视野进行穿过基质胶的细胞计数,处理组分别为35.8±3.74、34.1±2.02、31.7±4.81、17.2±3.08、13.2±3.36个,较对照组39.5±2.99个明显减少,呈剂量依赖性(P<0.05)。2. DADS对人胃癌MGC803细胞LIMK1的表达具有下调作用RT-PCR结果显示,30 mg·L-1 DADS与MGC803细胞作用48h后,LIMIK1 mRNA水平明显下调。Western blot显示,30 mg·L-1 DADS分别与MGC803细胞作用6、12、24、48 h后,LIMK1蛋白的表达水平呈时间依赖性下降,表明DADS可抑制人胃癌MGC803细胞LIMK1蛋白的表达。免疫组化检测显示30 mg·L-1 DADS分别与MGC803细胞作用6、12、24、48 h后,LIMK1蛋白的表达呈时间依赖性下降。3. DADS可抑制cofilin1的磷酸化水平,但对Destrin的表达无影响RT-PCR和Western blot结果均显示30 mg·L-1 DADS对MGC803细胞cofilin1的表达没有影响,但Western blot显示,30 mg·L-1 DADS作用MGC803细胞6、12、24、48 h后,cofilin1的磷酸化水平呈时间依赖性地下降。另外,RT-PCR和Western blot结果显示30 mg·L-1 DADS对Destrin的表达没有影响。4. DADS对Rac1-Rock1/Pak1通路具有抑制作用RT-PCR显示,DADS (30 mg·L-1)作用48 h后,可在mRNA水平上抑制MGC803细胞Rac1、Rock1、Pak1的表达。Western blot显示DADS (30 mg·L-1)作用MGC803细胞6、12、24、48 h后,Rac1、Rock1、Pak1蛋白表达水平呈时间依赖性地下降。结论:1. DADS可抑制人胃癌MGC803细胞增殖、迁移与侵袭能力。2. DADS抗肿瘤细胞增殖、迁移与侵袭的机制与其下调LIMK1的表达,进而抑制cofilin1的磷酸化有关。3. DADS是通过阻断Rac1-Rock1/Pak1通路而抑制MGC803细胞LIMK1的表达。