南海鳗鱼寄生异尖线虫的分子鉴定

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根据形态学的观察,从尖尾鳗(Uroconger lepturus),大眼拟海康吉鳗(Parabathymurusmacrophthalmus),绿尾草鳗(Chlopsis fierasfer),大眼油鳗(Myrophis macrophthalmus),尼氏突吻鳗(Rhynchocymba nystromi)等鳗鱼检测到的寄生线虫中挑出幼虫1068条(异尖属线虫除外)。应用PCR-PFLP技术对其进行鉴定。扩增出核糖体DNA内转录间隔区(ITS)序列,对PCR产物分别用HinfI和RsaI内切酶进行酶切,经电泳分析后区分出三种不同的带型。选择每个带型的样品3个进行测序,将测得的序列与Genbank比对,确定为三个种。通过系统进化分析,发现Y1,Y3,Y5都聚类在宫脂属这一分支,Y1与灰海鳗对盲囊线虫Contracaecum muraenesoxi聚类在一起,Y5与带鱼针蛔线虫Raphidascaris trichiuri聚类在一起,表明Y1是Contracaecum muraenesoxi,Y5是Raphidascaris trichiuri,这与序列比对的结果相吻合,Y3处于宫脂属中间,可以确定为宫脂属的未定种。而Contracaecum muraenesoxi已被证实为厦门宫脂线虫Hysterothylacium amoyense的同物异名,最终,确定三个种分别是厦门宫脂线虫Hysterothylacium amoyense,宫脂线虫未定种Hysterothylacium sp.NH-2012和带鱼针蛔线虫Raphidascaris trichiuri。经统计,在南海鳗鱼的三种寄生线虫中Hysterothylacium sp.NH-2012为优势种,其次为厦门宫脂线虫Hysterothylacium amoyense和带鱼针蛔线虫Raphidascaris trichiuri。其数量分布为,尖尾鳗(Uroconger lepturus)566/37/9,大眼拟海康吉鳗(Parabathymurusmacrophthalmus)192/6/5,绿尾草鳗(Chlopsis fierasfer)100/12/0,大眼油鳗(Myrophismacrophthalmus)15/8/0,尼氏突吻鳗(Rhynchocymba nystromi)88/9/0,前肛鳗(Dysommaanguillaris)3/0/1,黑尾突吻鳗(Rhynchocymba ectenura)6/1/1,油鳗(Myrophis cheni)2/0/0,杂食豆齿鳗(Pisoodonophis boro)3/1/1,突吻鳗(Rhynchoconger ectenurus)2/0/0,褐海鳗(Muraenesox talabonoides)0/1/0。三个种的平均感染强度最高的是未定种(Hysterothylacium sp.),其中尖尾鳗(Uroconger lepturus)35,尼氏突吻鳗(Rhynchocymbanystromi)21,绿尾草鳗(Chlopsis fierasfer)25,大眼拟海康吉鳗(Parabathymurusmacrophthalmus)48。厦门宫脂线虫(Hysterothylacium amoyense)和带鱼针蛔线虫(Raphidascaris trichiuri)的平均感染强度都较低(1-3.25)。鳗鱼是我国重要的经济鱼类,本实验是国内首次关于南海鳗鱼的寄生线虫幼虫进行了分子鉴定,为鳗鱼的开发,人工养殖,鱼类寄生虫病的防治等提供了科学依据。
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