全球约有40%的人口患有过敏症,我国约有2亿人患有过敏症,过敏症发病率的显著上升已经成为许多国家关注的全球性问题。同时过敏性疾病给各个国家带来的巨大的经济负担。因此,面对全世界过敏性疾病流行现状,为了降低过敏性疾病的发病率,建立和制定有效的预防和治疗方法已迫在眉睫。引起过敏性疾病的主要原因之一就是尘螨,全世界将近10%的人口对尘螨敏感,超过90%的过敏性哮喘病人对尘蹒敏感。尘螨中最主要的三种是粉尘螨、屋尘螨和热带无爪螨。海南地区是我国适合热带无爪螨孳生的主要地区之一。因此,热带螨诱发的支气管哮喘是海南省内具有地区特色的、广为流传、危害较大的疾病类型。当前,对于热带无爪螨诱发的过敏反应研究甚少,对热带无爪螨主要变应原的结构及其所发挥的作用还未有明确的认识,缺少行之有效的预防和诊治方法。目的:设计重组融合变应原蛋白,取代热带螨总变应原的粗提物,为将来临床应用于热带螨过敏检测打下基础:其次,设计病毒样颗粒疫苗,研究其在热带螨过敏小鼠模型中的治疗效果,为开发热带螨过敏症的治疗性疫苗奠定基础。方法:1.通过对热带螨主要变应原B1o t 5和Blo t 21的序列进行密码子优化,构建重组蛋白表达质粒PQE80L-rBlo t 5、PQE80L-rBlo t 21、PQE80L-rBlo t 5-21,并通过镍柱纯化获得纯化蛋白;2.分别利用重组蛋白rBlo t 5、rBlo t 21和rBlo t 5-21诱导小鼠过敏模型,通过ELISA检测小鼠血清中IgE水平、小鼠静脉注射rBlo t 5-21观察小鼠应激反应、小鼠肺部组织切片HE染色等对小鼠模型进行评估;3.病毒样颗粒疫苗 HBcAg-rBlo t 5、HBcAg-rBlo t 21、HBcAg-rBlo t 5-21 表达载体的构建及原核表达,并通过透射电子显微镜观察样品形态,判断重组蛋白是否能够自我装配成病毒样颗粒;4.利用病毒样颗粒疫苗HBcAg-rBlo t 5-21对过敏模型小鼠进行治疗,通过ELISA检测小鼠血清中IgE、IgG、IgG1和IgG2a水平、小鼠尾静脉注射rBlo t 5-21观察小鼠应激反应、小鼠肺部组织切片HE染色等对HBcAg-rBlo t 5-21的治疗效果进行评估;5.利用生物信息学方法对热带螨主要变应原Blo t 5和Blo t 21的抗原表位进行分析,合成抗原表位多肽并对其进行免疫原性鉴定。结果:1.通过原核表达和纯化获得了可溶性的重组蛋白rBlo t 5、rBlo t 21和rBlo t 5-21;2.分别使用重组蛋白rBlo t 5、rBlo t 21和rBlo t 5-21诱导过敏模型小鼠,三组过敏模型小鼠的IgE水平均显著升高(P<0.05),rBlo t 5-21诱导组小鼠静脉注射rBlo t 5-21后体温显著下降(P<0.05),且反应相较于rBlo t 5组和rBlo t 21组更为敏感和强烈。rBlo t 5-21组小鼠的肺部组织细胞浸润显著增加(P<0.05);3.乙肝核心抗原HBcAg与热带螨主要变应原rBlo t 5、rBlo t 21融合表达与纯化,获得了可溶性重组蛋白 HBcAg-rBlo t 5、HBcAg-rBlo t 21、HBcAg-rBlo t 5-21,并通过电镜观察到了HBcAg-rBlo t 5-21呈现病毒样颗粒结构;4.病毒样颗粒疫苗HBcAg-rBlo t 5-21治疗组模型小鼠血清中IgE水平显著下降(P<0.05),但仍处于一个较高水平。治疗组模型小鼠静脉注射rBlo t 5-21后,体温变化不明显,说明其机体受到有效保护。同时治疗组模型小鼠的肺部组织细胞浸润也显著下降(P<0.05);5.通过生物信息学方法分析获取了热带螨主要变应原Blot5和Blo t 21的抗原表位,并通过免疫原性鉴定确定了B5EP18-37、B21EP18-31 和 B21EP36-54 为主要的抗原表位。结论:本研究成功表达出了热带螨主要变应原的重组蛋白rBlo t 5、rBlo t 21及其融合蛋白rBlo t 5-21,为取代热带螨过敏症免疫治疗中的变应原总粗提物奠定了基础。并成功利用热带螨重组变应原rBlo t 5-21诱导构建了过敏模型小鼠,为热带螨过敏的诊断与治疗奠定基础,同时也为预防与治疗热带螨过敏疾病的疫苗或者药物的研制提供了动物模型。病毒样颗粒疫苗HBcAg-rBlo t 5-21在对过敏模型小鼠的治疗中取得一定的治疗效果,为热带螨过敏症疫苗的研制提供了参考。通过生物信息学方法分析获得热带螨主要变应原Blo t5和Blo t 21的主要抗原表位为本研究后续构建病毒样颗粒表位疫苗奠定了基础,同时也为热带螨过敏症的表位疫苗的研制提供了参考。