论文部分内容阅读
目的：探讨钙调神经磷酸酶对Aβ1–42所致阿尔茨海默病大鼠模型记忆的影响及其作用机制。方法：采用morris水迷宫实验测试36只雄性SD大鼠5天的平均逃避潜伏期，根据总的逃避潜伏期用随机数字表法把36只SD大鼠平均分为AD组、FK506组和对照组。用Aβ寡聚体双侧海马区注射制作AD模型，根据大鼠体重，用CaN抑制剂FK506干预FK506组，AD组和对照组注射安慰剂。采用morris水迷宫实验检测大鼠实验后的学习记忆能力；透射电子显微镜观察大鼠海马区神经元细胞突触数目的减少情况；RT-PCR检测Bad、caspase-3、homer1b、shank1mRNA的表达；免疫组化检测凋亡蛋白Bad和caspase-3的表达；TUNEL检测凋亡细胞;western blot检测突触后密度蛋白homer1b和shank1。结果：实验前AD模型组、FK506组和对照组总平均逃避潜伏期均无差异（P﹥0.05）。与FK506组和对照组相比，AD组实验后每天平均逃避潜伏期延长，P﹤0．05，差异有统计学意义；与FK506组和对照组相比，AD组实验后总平均逃避潜伏期延长，P﹤0．05，差异有统计学意义；与对照组和FK506组相比，AD组实验后平均穿越平台数明显减少，P﹤0．05，差异有统计学意义。透射电子显微镜结果显示，与FK506组与对照组相比，AD模型组突触数目明显减少，P﹤0．05，差异有统计学意义。PCR结果显示，与对照组相比，AD组和FK506组Bad mRNA表达上调，P﹤0.05，差异有统计学意义；与对照组和FK506组相比，AD组Caspase-3mRNA表达上调，P﹤0.05，差异有统计学意义；与对照组和FK506组相比，AD组Homer1b mRNA表达下调，P﹤0.05，差异有统计学意义；与对照组和FK506组相比，AD组Shank1mRNA表达下调，P﹤0.05，差异有统计学意义。免疫组化结果显示，与对照组相比，AD组和FK506组大鼠海马各区神经元Bad蛋白表达增多，平均积分光密度值增大，P﹤0.05，差异有统计学意义；与对照组和FK506组相比，AD组大鼠海马各区神经元Caspase-3蛋白表达增多，平均积分光密度值变大，P﹤0.05，差异有统计学意义。TUNEL染色结果显示，与对照组和FK506组相比，AD组大鼠海马各区神经元细胞凋亡率增加，P﹤0.05，差异有统计学意义。Western blot灰度值分析结果显示，AD组Homer1b蛋白表达下调，与对照组和FK506组相比，AD组灰度值减小，P﹤0.05，差异有统计学意义；AD组Shank1蛋白表达下调，灰度值分析结果显示，与对照组和FK506组相比，AD组灰度值减小，P﹤0.05，差异有统计学意义。结论：1.在Aβ寡聚体海马区注射的AD大鼠模型中，活化的CaN介导Bad的去磷酸化，去磷酸化的Bad使caspase-3活化，最终导致神经元细胞的凋亡，而CaN抑制剂FK506可以抑制CaN介导的神经细胞凋亡。2.Aβ寡聚体海马区注射的AD大鼠模型，海马区神经元细胞出现突触数目的减少和突触后密度蛋白表达下调，而CaN抑制剂FK506可以抑制上述情况的发生，并且可以推断突触后树突棘的丢失和突触数目减少可能与Aβ所致的突触后密度蛋白homer1b和shank1的表达下调有关。