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肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是原发性肝癌的主要类型,近年来发病率和死亡率都呈增高趋势。目前,临床上尚无很好的肝癌早期诊断指标,大部分患者确诊时已是中晚期。由于错过了有效的治疗时机,导致预后差、生存率低。因此,寻找一种敏感而特异的HCC早期诊断指标仍是有必要的。许多研究发现miRNA在HCC患者的血清或血浆中表达失调,可能对HCC有早期诊断价值。然而,目前还没有肝癌特异性循环mi RNA在乙肝病毒(HBV)相关小HCC与HBV相关良性肝病的差异表达谱的相关研究报道。通过比较以发现在HBV相关小HCC中差异表达的miRNAs有助于HBV相关HCC的早期诊断。目的:本研究拟通过对人类乙型肝炎病毒(HBV)相关的小肝细胞癌(HCC)、肝硬化、肝炎病人和正常人循环microRNA(miRNA)表达谱比较,筛选出循环中差异表达的miRNA。方法:选取HBV相关小HCC(23例)、乙肝肝硬化(20例)、乙肝肝炎(20例)及健康对照(16例)血浆/血清标本,利用miScript miRNA PCR Array检测84个人类相关miRNA在以上标本中的表达,以倍数变化≥2表示有差异,筛选出各组较正常组差异表达的循环miRNA。进一步选取肝癌(30例)、肝硬化(30例)、肝炎(30例)和健康人(30例)血清标本,分别提取各自的总RNA,采用quantitative real-time reverse-transcription polymerase chain reaction(qRT-PCR)法检测血清miR-222在各组的表达量,并对筛选结果进行验证。结果:在血浆PCR array两次实验中,健康对照、慢乙肝与肝硬化三组43个miRNAs扩增曲线和溶解曲线均良好,但内参变化倍数超过2;肝癌组84个miRNAs均未扩增。综合分析血清两次实验结果,质控达标,59个miRNAs的扩增曲线和溶解曲线均良好。慢乙肝、肝硬化和小HCC三组血清中相对于健康对照共有18个差异表达的miRNAs,分别为9个(miR-17、miR-195、miR-19a、miR-19b、miR-20a、miR-25、miR-92a、miR-15b、miR-16)、3个(miR-195、miR-25、miR-16)、11个(miR-100、miR-17、miR-18a、mi R-195、mi R-19a、miR-20a、miR-223、miR-25、miR-145、miR-15b、miR-16)miRNAs上调,1个(miR-205)、3个(miR-125b、miR-205、miR-26b)、3个(miR-200a、mi R-205、miR-222)miRNAs下调;在三组中均上调的有miR-195、miR-25、mi R-16,均下调的有miR-205;其中仅在小HCC中上调的为miR-18a、miR-100、mi R-145、miR-223四个基因,变化倍数分别为3.48、2.95、2.12、3.91,下调的为miR-200a、miR-222,变化倍数分别为0.39、0.50。进一步以表达下调的miR-222进行验证,健康对照组、肝炎组、肝硬化组及肝癌组血清miR-222的相对表达量分别为1.799±1.898、2.210±2.340、2.167±2.173及1.056±1.024,表明miR-222表达在肝癌组较正常组低表达。结论:本研究发现慢乙肝、肝硬化和小HCC三组血清中相对于健康对照共有18个差异表达的miRNAs,其中有6个miRNAs在HBV相关的小HCC血清中较其它良性肝病差异表达,为选择HBV-HCC早期诊断有关的miRNA和大样本验证奠定了基础。血清miR-222的表达在肝癌组较正常组降低,提示miR-222可能与HCC的发生发展相关。