野生和低盐养殖线性硬毛藻(Chaetomorpha linum)多糖的提取分离、结构表征及活性评价

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本文以野生和低盐养殖线性硬毛藻(Chaetomorpha linum)为研究对象,经85%乙醇脱脂后,通过室温水、85℃热水、85℃5%碳酸钠水溶液提取,共得到了5种粗多糖CLCa、CLHa、CLAa、CLCb、CLHb,产率分别为:2.3%,14.3%,3.1%,3.2%,26.3%。运用醋酸纤维素薄膜电泳(CAME)、高效凝胶渗透色谱-多角度激光散射(HPGPC-MALLS)法、高效液相色谱法(HPLC)、红外光谱法(IR)等方法对多糖的纯度、分子量、单糖组成和结构特征进行分析。结果表明CLCa、CLHa、CLAa、CLCb和CLHb硫酸基含量分别为11.4%,13.0%,9.4%,9.8%和11.3%;分子量分别为129.5,602.3,417.4,62.85和484.2kDa,并且CLHa和CLHb为分子量均一的多糖;5种多糖均含有不同含量的葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖,其面积百分比分别为29.4:30.9:28.9、3.7:21.0:67.2、6.2:33.4:57.2、56.1:33.4:8.3和16.0:19.9:57.3。因此,野生和低盐养殖线性硬毛藻多糖主要为硫酸阿拉伯半乳聚糖;低盐养殖线性硬毛藻多糖的分子量和硫酸基含量低于野生线性硬毛藻多糖,但其葡萄糖含量高,表明低盐养殖后,不仅降低其分子量和硫酸基含量,而且也会改变多糖中单糖比例。在上述理化性质分析的基础上,对得率较高的CLHa和CLHb进一步采用强阴离子交换树脂进行分离纯化,共得到了12种纯化组分CLHa1~6和CLHb1~6。对12种纯化多糖的理化性质进行了分析,分子量在115~528kDa之间,硫酸基含量在9.4%~13.8%之间;各组分的单糖组成主要以阿拉伯糖和半乳糖为主。高效凝胶渗透色谱(HPGPC)和醋酸纤维素薄膜电泳的结果显示CLHa5为分子量和电荷密度均一的组分;CLHa5的分子量为170kDa,硫酸基含量为13.8%,单糖组成以半乳糖(19.8%)和阿拉伯糖(71%)为主。通过CLHa5脱硫前后甲基化和核磁共振波谱的数据可知,CLHa5是一个高度分支的多糖,是以-(1→4)-D--Galp、-(1→4,6)-D-Galp和β-(1→3,4)-L-Arap为主链,以β-(1→4)-L-Arap和β-(1→4)-L-Arap2S为支链的硫酸多糖,支链末端主要为Xylp和Araf。为进一步确定其细微结构,选CLHa5为研究对象制备寡糖,确定最佳降解条件为0.2M HCL、80℃、1.5h。采用Bio-Gel P4对寡糖混合物进行分离纯化,制备了一系列A9S8、A8S7、A7S7等不同聚合度不同硫酸化程度的阿拉伯寡糖,结合电喷雾离子化质谱技术(ESI-MS)确定了寡糖的聚合度和硫酸基的数目,硫酸化的阿拉伯寡糖为下一步的生物活性实验提供了基础。对多糖和寡糖进行-糖苷酶抑制活性、抗凝血和抗氧化活性评价。结果表明,低盐养殖线性硬毛藻热水提多糖CLHb和经化学结构修饰后的野生线性硬毛藻热水多糖提多糖CLHo具有较好的-糖苷酶抑制活性,但线性硬毛藻多糖的抗凝血活性和抗氧化活性低于阳性对照。
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