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莴苣花叶病毒(Lettuce mosaic virus,LMV)是侵染莴苣的常见病原物;玉米褪绿斑驳病毒(Maize chlorotic mottle virus,MCMV)和瓜类细菌性果斑病菌(A.citrulli)均是侵染农作物的有害生物;国际间的交流合作导致以上三种病原物在世界范围内分布广泛。基于以上背景,本研究针对以上三种病原物采用双抗夹心法原理,通过纳米酶(Nanozyme )偶联抗体与硝酸纤维素上质控线上的抗体结合,并在二氨基联苯胺(Diaminobenzidine,DAB)的作用下进行显色,建立纳米酶试纸条检测技术。主要结果如下:
(1)莴苣花叶病毒纳米酶试纸条检测技术的建立
以莴苣花叶病毒为研究对象,建立纳米酶试纸条检测技术(Detection Technology of Nanozyme Strip,DTNS)。采用研制的DTNS和酶联免疫吸附测定法(ELISA)对提纯LMV进行灵敏度比较试验,结果显示DTNS和ELISA可分别检测低至102ng/mL和103ng/mL的提纯LMV,前者比后者灵敏度高10倍,表明该试纸条具有较高的灵敏度,同时又具有比ELISA操作简单,价格低廉上的优势。用同属同寄主作对照进行特异性试验,结果显示只有LMV为阳性,7种对照病毒均为阴性,表明建立的DTNS具有良好的特异性。用研制的试纸条对待测样品进行检测,并用ELISA方法及基因测序方法对检测结果进行验证,数据显示三者检测结果一致。
(2)玉米褪绿斑驳病毒纳米酶试纸条检测技术的建立
以玉米褪绿斑驳病毒为研究对象,建立纳米酶试纸条检测技术(Detection Technology of Nanozyme Strip,DTNS)。采用研制的DTNS和反转录PCR法(RT-PCR)对玉米褪绿斑驳病毒研磨液检测,灵敏度分别为10-7和10-5;用其它4种病毒作对照进行特异性试验,无交叉反应;用该试纸条对供试样品进行检测,并以RT-PCR方法及基因测序方法对检测结果进行验证,结果表明三者检测结果一致。
(3)瓜类细菌性果斑病菌纳米酶试纸条检测技术的建立
以瓜类细菌性果斑病菌为研究对象,建立纳米酶试纸条检测技术(Detection Technology of Nanozyme Strip,DTNS)。采用纳米酶试纸条和胶体金试纸条对瓜类细菌性果斑病菌10倍梯度稀释后菌液进行检测,结果表明,其最低检测浓度分别为4.36?107cfu/mL和3.46?106cfu/mL;用其它5种细菌作对照进行特异性试验,无交叉反应,具有良好的特异性;用纳米酶试纸条和胶体金试纸条检测用针刺法接种的瓜类细菌性果斑病菌的待测叶片,二者检测结果一致。
建立的纳米酶试纸条检测技术具有良好特异性,及较高灵敏度的优点,使得病原物的检测速度加快,在一定程度的防止病原物大范围的在田间传播。该检测技术为病原物提供了一种新的快速检测方法,同时新型材料纳米酶也在植物检疫领域得到了应用,对于保护农作物具有重要意义。
(1)莴苣花叶病毒纳米酶试纸条检测技术的建立
以莴苣花叶病毒为研究对象,建立纳米酶试纸条检测技术(Detection Technology of Nanozyme Strip,DTNS)。采用研制的DTNS和酶联免疫吸附测定法(ELISA)对提纯LMV进行灵敏度比较试验,结果显示DTNS和ELISA可分别检测低至102ng/mL和103ng/mL的提纯LMV,前者比后者灵敏度高10倍,表明该试纸条具有较高的灵敏度,同时又具有比ELISA操作简单,价格低廉上的优势。用同属同寄主作对照进行特异性试验,结果显示只有LMV为阳性,7种对照病毒均为阴性,表明建立的DTNS具有良好的特异性。用研制的试纸条对待测样品进行检测,并用ELISA方法及基因测序方法对检测结果进行验证,数据显示三者检测结果一致。
(2)玉米褪绿斑驳病毒纳米酶试纸条检测技术的建立
以玉米褪绿斑驳病毒为研究对象,建立纳米酶试纸条检测技术(Detection Technology of Nanozyme Strip,DTNS)。采用研制的DTNS和反转录PCR法(RT-PCR)对玉米褪绿斑驳病毒研磨液检测,灵敏度分别为10-7和10-5;用其它4种病毒作对照进行特异性试验,无交叉反应;用该试纸条对供试样品进行检测,并以RT-PCR方法及基因测序方法对检测结果进行验证,结果表明三者检测结果一致。
(3)瓜类细菌性果斑病菌纳米酶试纸条检测技术的建立
以瓜类细菌性果斑病菌为研究对象,建立纳米酶试纸条检测技术(Detection Technology of Nanozyme Strip,DTNS)。采用纳米酶试纸条和胶体金试纸条对瓜类细菌性果斑病菌10倍梯度稀释后菌液进行检测,结果表明,其最低检测浓度分别为4.36?107cfu/mL和3.46?106cfu/mL;用其它5种细菌作对照进行特异性试验,无交叉反应,具有良好的特异性;用纳米酶试纸条和胶体金试纸条检测用针刺法接种的瓜类细菌性果斑病菌的待测叶片,二者检测结果一致。
建立的纳米酶试纸条检测技术具有良好特异性,及较高灵敏度的优点,使得病原物的检测速度加快,在一定程度的防止病原物大范围的在田间传播。该检测技术为病原物提供了一种新的快速检测方法,同时新型材料纳米酶也在植物检疫领域得到了应用,对于保护农作物具有重要意义。