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目的研究二氧化硅(Si O2)刺激的人II型肺泡上皮细胞系A549细胞所构造的矽肺早期急性肺损伤模型中水通道蛋白1(AQP-1)和水通道蛋白4(AQP-4)的表达及意义。方法1将培养的生长良好的对数生长期人II型肺泡上皮细胞系A549细胞分为对照组、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0 h染尘组和抑制剂组,各染尘组分别以质量浓度为50mg/L的Si O2混悬液刺激0.5、1.0、2.0、4.0、8.0 h,抑制剂组先分别以浓度为200μmol/L的AQP-1抑制剂Hg Cl2孵育3min(即检测AQP-1 m RNA相对表达水平的抑制剂组)或浓度为100μmol/L的AQP-4抑制剂TGN-020孵育2.0 h(即检测AQP-4 m RNA相对表达水平的抑制剂组),再以质量浓度为50mg/L的Si O2混悬液刺激1.0 h,另设不予任何处理的对照组;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)法检测AQP-1和AQP-4 m RNA的相对表达水平。2将A549细胞分为对照组、3.0、6.0、12.0、24.0 h染尘组和抑制剂组,各染尘组分别以质量浓度为50mg/L的Si O2混悬液分别刺激3.0、6.0、12.0、24.0 h,抑制剂组先分别以浓度为200μmol/L的AQP-1抑制剂Hg Cl2孵育3min(即检测AQP-1蛋白表达水平的抑制剂组)或浓度为100μmol/L的AQP-4抑制剂TGN-020孵育2.0 h(即检测AQP-4蛋白表达水平的抑制剂组),再以质量浓度为50mg/L的Si O2混悬液刺激6.0h,另设不予任何处理的对照组;分别采用免疫印迹法和免疫细胞化学法检测AQP-1和AQP-4的蛋白表达。3采用SPSS 19.0软件进行统计学分析,计量资料经正态性检验符合正态分布,以xˉ±s表示;多组组间均数比较采用单因素方差分析(Oneway ANOVA),均数间两两比较采用LSD法;以P<0.05为差异具有统计学意义。结果1 Real-time PCR法分析结果显示:与对照组相比,Si O2刺激后A549细胞AQP1和AQP-4 m RNA相对表达水平均呈现先升高后逐渐下降的趋势,均于Si O2刺激1.0h达高峰(P<0.01),于Si O2刺激8.0h趋于正常水平(P>0.05)。2免疫细胞化学法示AQP-1和AQP-4于A549细胞的胞浆和胞核中均有表达。3免疫印迹法和免疫细胞化学法定量分析结果均显示:与对照组相比,Si O2刺激后A549细胞AQP-1和AQP-4蛋白相对表达水平均呈现先升高后逐渐下降的趋势,均于Si O2刺激6.0h达高峰(P<0.01),但于Si O2刺激24.0h后仍未下降至正常水平(P<0.01)。4抑制剂组AQP-1和AQP-4 m RNA相对表达水平及蛋白表达水平均高于对照组,但均低于Si O2刺激相同时间的染尘组(P<0.01)。结论Si O2刺激使A549细胞AQP-1和AQP-4的表达增高,AQP-1和AQP-4的特异性抑制剂可分别减弱Si O2刺激引起的AQP-1和AQP-4的表达增高,推断AQP-1和AQP-4可能参与了Si O2刺激引起的矽肺早期急性肺损伤的发生发展过程。