miR-224靶向RASSF8在宫颈癌进展中的作用及其机制研究

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目的:验证miR-224在宫颈癌组织中表达上调,并明确miR-224对宫颈癌细胞生物学行为的作用及调控机制。方法:采用Stem-loop RT-PCR法检测148例宫颈鳞癌组织和64例宫颈正常上皮组织的miR-224的表达水平,收集整理临床病理资料,分析miR-224的表达水平与宫颈癌临床不良预后因素的相关性。在宫颈癌细胞株Siha和CaSki中,利用细胞转染技术过表达miR-224以及siRNA干扰RASSF8的表达,利用MTT法检测细胞增殖能力,流式细胞技术检测细胞周期分布,划痕试验和Transwell侵袭试验检测细胞的迁移和侵袭能力,并利用Real time RT-PCR和Western Blot的方法检测宫颈癌组织中IASSF8的mRNA和蛋白水平,最后利用双荧光素酶报告基因的方法确认miR-224与RASSF8靶向关系结果:1.miR-224在宫颈鳞癌组织的表达水平与宫颈正常上皮组织相比显著下调。miR-224高表达组有更高的FIGO分期、更大的肿瘤体积,更易于发生盆腔淋巴结转移、深间质浸润、以及脉管浸润。2.在宫颈癌细胞株中,过表达miR-224可增加Siha和CaSki细胞的增殖能力,促进细胞划痕的愈合和细胞的侵袭并且下调RASSF8的蛋白水平,但是对周期以及凋亡无明显影响。3.宫颈癌组织中IASSF8的表达量明显低于正常宫颈组织。4.miR-224可下调含RASSF83’UTR区报告质粒荧光素酶的活性,而不影响3’UTR区突变报告质粒的荧光素酶活性。5.在宫颈癌细胞中,干扰RASSF8的表达可促进Siha和CaSki细胞的迁移和侵袭能力但是对增值无影响。结论:1.miR-224的表达水平在宫颈癌组织与正常组织相比显著上调并且miR-224高表达与宫颈癌预后不良因素相关.2.miR-224表达上调参与了宫颈癌的进展过程,miR-224通过靶向RASSF8调控宫颈癌细胞的生物学功能。
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