随着社会的发展和物质文化水平的提高，人们对自身的外表形象日益关注。然而，色素性疾病的发生使皮肤颜色不均匀一致，造成美容问题，往往给患者精神上带来极大的烦恼。色素性疾病的发生往往是由于表皮中黑素细胞的活性、黑素体的大小、黑素体内合成黑素的多少、以及黑素颗粒在角质形成细胞内分布等各种因素中一个或多个因素出现问题所导致。因此，关于黑素细胞及黑素生物合成的调控问题的研究成为研究热点。黑素的生物合成是一个由酪氨酸酶催化体内酪氨酸羟化而启动的一系列生化反应过程，酪氨酸酶是黑素生成的限速酶。在黑素细胞及黑素生物合成的研究中，研究者多把酪氨酸酶的表达与活性作为一项重要的研究指标。 维甲酸类药物具有多种复杂的药理作用，临床上外用维甲酸可以治疗痤疮、光老化和多种角化性皮肤病。在外用该药的过程中，一些医生发现它对患者局部的皮肤颜色有一定的影响。国外学者试图通过实验来弄清维甲酸类药物改变肤色的作用机制，从而为应用维甲酸类药物治疗色素性疾病提供可靠的理论依据。1982年正常人黑素细胞体外纯培养的成功以及众多鼠黑素瘤细胞系的建立，为从细胞和蛋白分子水平研究维甲酸类药物对黑素细胞及黑素合成的影响奠定了基础。国外学者发现维甲酸对于酪氨酸酶活性、黑素含量以及黑素细胞增殖率均有不同程度的影响作用。近年来随着分子生物学技术发展的日新月异，使这项研究由分子水平逐渐进展至基因水平。 在本实验中我们主要通过应用逆转录聚合酶链反应(RT—PCR)技术在基因水平检测维甲酸、氢醌等药物对B16F10小鼠黑素瘤细胞酪氨酸酶mRNA表达的调控作用，并探讨其可能的作用机制。首先根据实验设计要求将B16F10细胞在加有不同浓度药物的新鲜培养基中培养一定时间后，消化收集细胞；用TRIzol试剂盒抽提细胞总RNA，然后将细胞总RNA逆转录为DNA；再以所得DNA为模板，采用PCR技术进行核酸扩增；扩增产物进行凝胶电泳，医学系2001级硕士研究生学位论文中文摘要 通过凝胶扫描仪将电泳所得扩增条带扫入计算机并分析实验结果。 实验结果显示:维甲酸对Bl 6F10细胞酪氨酸醉.砂认表达确有影响， 它能够下调B16F10细胞酪氨酸酶mRNA的表达;而且因维甲酸浓度、作用时 间的不同，这种下调作用亦有所不同。随着药物浓度的加大、作用时间的延 长，B16F10细胞酪氨酸酶mRNA的表达具有逐渐减弱的趋势。维甲酸浓度为 100 p mol/L、作用时间为72小时，酩氨酸酶耐州A的表达下调30.13%。而 氢酪无论是单独作用，还是与维甲酸联合作用对酪氨酸酶.兄认的表达均无 显著影响。通过实验我们发现维甲酸类药物抑制黑素细胞生成黑素作用的主 要机制是它能够在基因转录水平抑制酪氨酸酶mRNA的表达。在实验中我犷} 同时发现维甲酸对霍乱毒素诱导的酪氨酸酶mRNA表达上调具有抑制作用。 这说明维甲酸也可以通过cA知P/PKA途径调节酪氨酸醉基因表达，从而对黑 素的合成产生影响。可见，维甲酸除直接作用于酪氨酸酶基因转录外，还能- 够通过其它途径间接影响酪氨酸酶基因转录。 本实验结果为临床应用维甲酸类药物治疗色素性疾病提供了理论依据， 而且实验所得数据对临床配制相关外用药物的浓度亦具有一定的指导意义。- 关于维甲酸抑制酷氨酸酶基因转录作用的具体细节还有待于进一步的研究。