胶原蛋白止血海绵的研制

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胶原蛋白或称胶原是动物体内含量最丰富的蛋白质,在动物体内起支持、保护、连接等多种作用。目前,胶原已广泛应用于医学医药工业、食品工业、日用化学品工业、生物合成及胶原修饰等领域。本文以牛腱(T)为原料,利用无花果酶(F)和胃蛋白酶(P)提取胶原,重点研究胶原的提取及提纯工艺,实验表明,当提取实验的温度为4℃,物料比分别达到F:T=1:25和P:T=1:10时,胶原的提取效果最好,产率可达到77%左右。采用精过滤、高速离心、盐析及透析等工艺对胶原进行提纯,发现精过滤的效果略好于高速离心,盐析的最佳工艺为:氯化钠浓度3mol/L,盐析时间为36小时,透析的最佳时间应不少于7天。通过红外光谱,紫外光谱及氨基酸自动分析仪将所提取的蛋白质定性为胶原;通过SDS-PAGE凝胶电泳测试出所提取的胶原蛋白分子量大于300kDa,且纯度较高;通过透射电子显微镜观察到了胶原在溶液中的纤维状形态。选择戊二醛为交联剂交联胶原,制备胶原蛋白海绵,通过红外光谱发现所使用的交联剂浓度并没有破坏胶原分子结构,使胶原发生变性;DSC、TG测试表明胶原材料的热收缩温度和分解温度分别上升了13℃和11℃;扫描电镜测试表明经过戊二醛交联后海绵的微孔结构逐渐减少,结构趋于更加规整和致密;测试交联海绵的物理性质发现,交联导致胶原的吸水率及孔隙率下降,对溶出液的pH值影响不大。通过改变海绵制备过程中的溶液酸度、预冻温度、胶原浓度及预冻时间,研究以上参数对胶原海绵微观结构的影响,结果表明,预冻温度及胶原溶液的酸度是影响海绵微观结构的关键因素。选择微观形貌较好的胶原海绵进行动物实验,通过兔耳动脉创伤模型及兔肝脏创伤模型评价其止血性能,发现未交联的胶原海绵止血效果较好,对于兔耳动脉的平均止血时间为148s,出血量为0.77g,对于兔肝脏创伤模型的平均止血时间为202s,出血量为1.72g,止血性能基本接近于标准医用胶原蛋白海绵并略好于标准品,经过戊二醛交联后的胶原海绵止血性能出现一定程度的下降。
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