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泛素(ubiquitin)广泛存在于真核生物中,含有76个极其保守的氨基酸残基。泛素基因有泛素融合基因和多聚泛素基因两种形式。在真菌中发现泛素基因与蛋白翻译后修饰、蛋白降解、基因转录、信号传导和次级代谢产物形成有关。
红曲菌(Monascus)是一种典型的丝状真菌,早在一千年前的中国古籍中就有记载。红曲菌能产生多种具有重要生理活性的次级代谢产物。但有研究发现,大部分红曲菌株在发酵过程中会产生一种对人畜有害的真菌毒素—桔霉素。如若能分析清楚红曲菌产桔霉素相关的基因,利用基因工程手段构建不产桔霉素菌株,则可从根本上解决红曲菌生产过程中桔霉素产生的问题。泛素基因可能与红曲菌产桔霉素有关。因此,本论文研究了橙色红曲菌AS3.4384泛素基因及其侧翼序列,具体研究内容和结果如下:
1.采用Southern杂交技术,用橙色红曲菌AS3.4384cDNA消减文库Y130中的泛素基因EST片段作为探针,与橙色红曲菌AS3.4384基因组DNA酶切片段进Southern杂交,割胶回收目的片段进行克隆、测序与分析。研究结果表明橙色红曲菌AS3.4384含有多聚泛素基因和泛素融合基因。
2.分析橙色红曲菌AS3.4384泛素基因的侧翼序列。用Blastx程序分析本实验中得到的含有泛素基因的U2、U3、U6三个克隆子,结果表明U2中的泛素基因下游是一个与细胞有丝分裂过程中纺锤体与染色体着丝点结合有关的检验点蛋白激酶基因;U3中的泛素基因下游是一个与细胞极性化生长有关的细胞极性蛋白基因;U6中的泛素基因下游是一个与DNA复制与修复有关的姐妹染色单体结合蛋白基因。
3.采用Sau3AI酶切橙色红曲菌AS3.4384基因组,回收2-4Kb片段,利用pUC119作为载体,构建橙色红曲菌AS3.4384基因组文库,得到25000多个克隆子,筛选到含有泛素基因的阳性克隆子3个,为分析橙色红曲菌AS3.4384泛素基因及其它基因提供一个技术平台。