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目的:应用RT-PCR及免疫组织化学法检测正常卵巢组织、卵巢上皮性良性肿瘤以及上皮性卵巢癌中LKB1和mTOR的表达情况,并分析二者的相关性及其与上皮性卵巢癌临床病理因素间的关系,探讨其在卵巢上皮性肿瘤发生、发展过程中的作用机制,从而为上皮性卵巢癌的早期诊断、分子靶向治疗和预后判断提供新的理论依据。方法:1研究对象选取河北医科大学第四医院经手术切除并经病理证实的卵巢上皮性肿瘤63例,包括卵巢上皮性良性肿瘤20例及上皮性卵巢癌43例。另取因其他疾病而手术切除的正常卵巢组织20例作为正常对照。全部患者术前均未接受放射治疗和化学治疗。2逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)提取总RNA,反转录合成cDNA,建立PCR反应体系,95℃预变性8min,之后经过变性95℃45s,退火55℃或58℃35s,延伸72℃1min,38次或35次循环扩增,再经72℃7min,4℃终止反应。PCR产物经1%琼脂糖凝胶电泳120V,30min。采用凝胶分析软件Gel Pro Analysizer3.1进行定量,以目的基因与内参基因的比值表示目的基因相对表达量。3免疫组织化学(immunohistochemistry, IHC)按照S-P免疫组化检测试剂盒所示步骤检测LKB1和mTOR蛋白的表达,再经DAB显色,苏木素复染,常规梯度酒精脱水、二甲苯透明、中性树胶封片,在显微镜下进行观察。实验设PBS代替一抗为空白对照,己知阳性片作阳性对照。4统计学处理与分析所有数据采用SPSS13.0统计软件进行统计分析。计数资料采用行×列表资料的x~2检验,两两比较采用分割法,指标间的相关性分析采用Spearman秩相关;计量资料采用单因素方差分析,用SNK法进行两两比较,用直线相关分析各指标间的相关关系。检验水准α=0.05,即P≤0.05为差异有统计学意义。结果:1卵巢上皮性肿瘤中LKB1的表达1.1LKB1mRNA的表达及其与临床病理参数之间的关系正常卵巢组织和卵巢上皮性良性肿瘤中LKB1mRNA表达水平分别为0.55±0.04和0.48±0.03,明显高于上皮性卵巢癌,差异有统计学意义(P<0.05)。但正常卵巢组织与卵巢上皮性良性肿瘤之间LKB1mRNA表达量的差异无统计学意义。LKB1mRNA在临床分期Ⅰ、Ⅱ期中的表达量显著高于Ⅲ、Ⅳ期,P<0.05,差异有统计学意义;不同组织学分级中,高、中分化组织的表达量(0.22±0.04)与低分化组织(0.04±0.01)之间差异有显著性,P<0.05;在卵巢癌的不同病理类型及不同患病年龄组,LKB1mRNA的表达无明显差异(P>0.05)。1.2LKB1蛋白的表达及其与临床病理参数之间的关系LKB1蛋白在卵巢癌组织中的阳性表达率为30.2%(13/43),明显低于正常卵巢组织90.0%(18/20)和良性肿瘤75.0%(15/20)(P<0.05)。卵巢癌患者LKB1蛋白的阳性表达率与肿瘤组织学分级、临床分期有关(P<0.05),而与患者年龄、肿瘤病理类型无关(P>0.05)。2卵巢上皮性肿瘤中mTOR的表达2.1mTOR mRNA的表达及其与临床病理参数之间的关系正常卵巢组织和卵巢上皮性良性肿瘤中mTOR mRNA表达水平分别为0.14±0.03和0.19±0.04,明显低于上皮性卵巢癌,差异有统计学意义(P<0.05)。mTOR mRNA的表达水平在不同的年龄组及病理类型中的差别无统计学意义(P>0.05);而组织分化程度越低及临床分期越晚,mTORmRNA的表达水平随之增高,即低分化组明显高于中高分化组,Ⅲ-Ⅳ期明显高于Ⅰ-Ⅱ期,差别有统计学意义(P<0.05)。2.2mTOR蛋白的表达及其与临床病理参数之间的关系mTOR蛋白在上皮性卵巢癌中阳性表达率为81.4%(35/43),明显高于正常卵巢组织20.0%(4/20)和卵巢上皮性良性肿瘤40.0%(8/20)(P<0.05)。mTOR蛋白在低分化上皮性卵巢癌中的的阳性表达率高于高-中分化癌组,有统计学意义(P<0.05);上皮性卵巢癌临床分期越晚,mTOR表达越强(P<0.05);mTOR的阳性表达率在不同患病年龄组及不同病理类型上皮性卵巢癌中不存在显著差异(P>0.05)。3LKB1和mTOR表达的相关性3.1LKB1和mTOR mRNA表达的相关性在mRNA水平,LKB1与mTOR的表达呈负相关(r=-0.946, P=0.000,P<0.01)。3.2LKB1和mTOR蛋白表达的相关性在免疫组化蛋白表达水平,统计结果分析表明LKB1与mTOR的表达呈负相关(r_s=-0.726, P=0.000, P<0.01)。结论:1LKB1mRNA在上皮性卵巢癌中的表达量明显低于正常卵巢组织和卵巢上皮性良性肿瘤,说明LKB1作为一种抑癌基因,其基因表达的缺失,可能促进了上皮性卵巢癌的发生、发展;而在上皮性卵巢癌组织中mTORmRNA则呈现出表达上调的趋势,提示mTOR的过表达与上皮性卵巢癌的形成密切相关。2LKB1蛋白在上皮性卵巢癌组织中的阳性表达率与其在正常卵巢组织和卵巢上皮性良性肿瘤组织中的阳性表达率相比呈下降趋势,提示LKB1在一定程度上能够抑制上皮性卵巢癌的发生;在上皮性卵巢癌中mTOR蛋白的阳性表达率明显高于另外两种组织,表明mTOR在卵巢肿瘤的恶性转化过程中具有重要的作用。3在mRNA和蛋白水平,LKB1和mTOR均与上皮性卵巢癌的临床分期、组织分化程度存在着密切关系,说明了LKB1和mTOR可能参与了上皮性卵巢癌的侵袭、转移等,在上皮性卵巢癌的临床诊断和判断预后方面具有重要价值。4研究结果显示LKB1和mTOR的表达呈现负相关,即在同一组织中,LKB1的表达水平随着mTOR表达水平的升高而降低。提示二者在上皮性卵巢癌的发生、发展过程中起着相反的作用,LKB1表达的缺失可能引起mTOR表达的上调,共同促成了肿瘤的形成。5通过对LKB1和mTOR的研究,更加深入的了解上皮性卵巢癌的发病机制,为上皮性卵巢癌的早期诊断提供理论依据,为卵巢癌的治疗提供潜在的靶点及新的思路,从而改善卵巢癌患者的预后以及提高生存率。