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目的:
探讨茵陈四苓颗粒联合脂肪间充质干细胞对急性肝衰竭大鼠的疗效及可能的作用机制。
方法:
用以下4种干预手段干预急性肝衰竭大鼠,通过检测各组大鼠肝功能、病理组织、NF-κB、炎症因子以及生长因子来探讨此4种干预手段对急性肝衰竭大鼠的保护机制。
1、制备脂肪间充质干细胞:提取、培养脂肪间充质干细胞(ADSCs),提纯、传代,取第三代ADSCs用于流式细胞仪及免疫荧光鉴定;以及用于E、F组干预治疗。
2、分组造模:60只SD雄性大鼠,随机平分为6组,分别为正常组(A组)、模型组(B组)、复方甘草酸苷组(C组)、茵陈四苓颗粒组(D组)、脂肪间充质干细胞组(E组)、茵陈四苓颗粒联合脂肪间充质干细胞组(F组)。实验开始,A组予以5ml生理盐水腹腔注射,24h后再次等量注射;其余各组腹腔注射硫代乙酰胺(TAA)300mg/kg,24h后再次等量注射。于第一次腹腔注射后:A组:等量生理盐水灌胃、每天2次;B组:等量生理盐水灌胃、每天2次;C组:复方甘草酸苷片15mg/kg灌胃、每天2次;D组:茵陈四苓颗粒1.5g/kg灌胃、每天2次;E组:等量生理盐水灌胃、每天2次,尾静脉注射脂肪间充质干细胞(ADSCs)悬液约1ml(1.0×106个);F组:茵陈四苓颗粒1.5g/kg灌胃、每天2次,尾静脉注射脂肪间充质干细胞(ADSCs)悬液约1ml(1.0×106个)。除E、F组外各组尾静脉注射1ml完全培养基。
3、检测:各组第二次腹腔注射48h后麻醉大鼠,腹主动脉采血,取新鲜肝组织。检测ALT、AST、TBIL;HE染色观察肝组织病理;酶联免疫吸附法(ELISA)法检测炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6及生长因子HGF、VEGF;免疫组化检测肝组织NF-κB。
结果:
1、成功提取、培养、传代脂肪间充质干细胞,第3代细胞表现为长梭形、旋涡样生长。免疫荧光鉴定提示ADSCs纯度达到90%以上;流式细胞仪鉴定提示:第3代 ADSCs表面分子高表达 CD44(75.69%)、CD90(99.84%),低表达CD45(0.02%),符合脂肪间充质干细胞鉴定特点。
2、大鼠肝功能检测结果:ALT、AST、TBIL水平:模型组(B组)较正常组(A组)明显升高;各干预组(C、D、E、F组)较B组有所降低,其中F组降低更显著(P<0.05)。
3、大鼠肝脏病理切片结果:B组肝组织损伤最为严重,肝细胞弥漫性坏死、水肿,大量炎性细胞浸润,肝小叶结构紊乱,造模成功;各干预组肝脏损伤程度较B组有所减轻,且有新生的肝细胞;其中F组损伤程度更小。
4、NF-κB检测结果:肝脏组织中NF-κB细胞数目:B组较A组明显升高,各治疗组较B组有所降低,其中F组降低更明显(P<0.05)。
5、炎症因子检测结果:TNF-α、IL-1β、IL-6水平:B组较A组明显升高,各治疗组较B组有所下降,其中F组下降更明显(P<0.05)。
6、生长因子检测结果:HGF、VEGF水平:B组较A组明显升高,各治疗组均较B组升高,E组较C、D组明显升高(P<0.05),F组较C、D、E组上升更显著(P<0.05);
结论:
1、茵陈四苓颗粒组、ADSCs组能有效降低肝功能水平、缓解肝脏病理损伤;
2、茵陈四苓颗粒组、ADSCs组能降低NF-κB、TNF-α、IL-1β、IL-6的表达,有效抑制炎症通路;
3、茵陈四苓颗粒组、ADSCs组能上调肝细胞生长因子(HGF)、血管内皮生长因子(VEGF)的表达,有效促进肝细胞的增生;
4、茵陈四苓颗粒与脂肪间充质干细胞(ADSCs)对急性肝衰竭大鼠的保护机制可能是通过抑制炎症信号通路( NF-κB)及其下游炎症因子( TNF-α、IL-1β、IL-6)表达,进而保护肝脏功能;也可能是通过上调HGF、VEGF的表达,促进肝细胞的增生,发挥对急性肝衰竭大鼠的保护作用。
探讨茵陈四苓颗粒联合脂肪间充质干细胞对急性肝衰竭大鼠的疗效及可能的作用机制。
方法:
用以下4种干预手段干预急性肝衰竭大鼠,通过检测各组大鼠肝功能、病理组织、NF-κB、炎症因子以及生长因子来探讨此4种干预手段对急性肝衰竭大鼠的保护机制。
1、制备脂肪间充质干细胞:提取、培养脂肪间充质干细胞(ADSCs),提纯、传代,取第三代ADSCs用于流式细胞仪及免疫荧光鉴定;以及用于E、F组干预治疗。
2、分组造模:60只SD雄性大鼠,随机平分为6组,分别为正常组(A组)、模型组(B组)、复方甘草酸苷组(C组)、茵陈四苓颗粒组(D组)、脂肪间充质干细胞组(E组)、茵陈四苓颗粒联合脂肪间充质干细胞组(F组)。实验开始,A组予以5ml生理盐水腹腔注射,24h后再次等量注射;其余各组腹腔注射硫代乙酰胺(TAA)300mg/kg,24h后再次等量注射。于第一次腹腔注射后:A组:等量生理盐水灌胃、每天2次;B组:等量生理盐水灌胃、每天2次;C组:复方甘草酸苷片15mg/kg灌胃、每天2次;D组:茵陈四苓颗粒1.5g/kg灌胃、每天2次;E组:等量生理盐水灌胃、每天2次,尾静脉注射脂肪间充质干细胞(ADSCs)悬液约1ml(1.0×106个);F组:茵陈四苓颗粒1.5g/kg灌胃、每天2次,尾静脉注射脂肪间充质干细胞(ADSCs)悬液约1ml(1.0×106个)。除E、F组外各组尾静脉注射1ml完全培养基。
3、检测:各组第二次腹腔注射48h后麻醉大鼠,腹主动脉采血,取新鲜肝组织。检测ALT、AST、TBIL;HE染色观察肝组织病理;酶联免疫吸附法(ELISA)法检测炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6及生长因子HGF、VEGF;免疫组化检测肝组织NF-κB。
结果:
1、成功提取、培养、传代脂肪间充质干细胞,第3代细胞表现为长梭形、旋涡样生长。免疫荧光鉴定提示ADSCs纯度达到90%以上;流式细胞仪鉴定提示:第3代 ADSCs表面分子高表达 CD44(75.69%)、CD90(99.84%),低表达CD45(0.02%),符合脂肪间充质干细胞鉴定特点。
2、大鼠肝功能检测结果:ALT、AST、TBIL水平:模型组(B组)较正常组(A组)明显升高;各干预组(C、D、E、F组)较B组有所降低,其中F组降低更显著(P<0.05)。
3、大鼠肝脏病理切片结果:B组肝组织损伤最为严重,肝细胞弥漫性坏死、水肿,大量炎性细胞浸润,肝小叶结构紊乱,造模成功;各干预组肝脏损伤程度较B组有所减轻,且有新生的肝细胞;其中F组损伤程度更小。
4、NF-κB检测结果:肝脏组织中NF-κB细胞数目:B组较A组明显升高,各治疗组较B组有所降低,其中F组降低更明显(P<0.05)。
5、炎症因子检测结果:TNF-α、IL-1β、IL-6水平:B组较A组明显升高,各治疗组较B组有所下降,其中F组下降更明显(P<0.05)。
6、生长因子检测结果:HGF、VEGF水平:B组较A组明显升高,各治疗组均较B组升高,E组较C、D组明显升高(P<0.05),F组较C、D、E组上升更显著(P<0.05);
结论:
1、茵陈四苓颗粒组、ADSCs组能有效降低肝功能水平、缓解肝脏病理损伤;
2、茵陈四苓颗粒组、ADSCs组能降低NF-κB、TNF-α、IL-1β、IL-6的表达,有效抑制炎症通路;
3、茵陈四苓颗粒组、ADSCs组能上调肝细胞生长因子(HGF)、血管内皮生长因子(VEGF)的表达,有效促进肝细胞的增生;
4、茵陈四苓颗粒与脂肪间充质干细胞(ADSCs)对急性肝衰竭大鼠的保护机制可能是通过抑制炎症信号通路( NF-κB)及其下游炎症因子( TNF-α、IL-1β、IL-6)表达,进而保护肝脏功能;也可能是通过上调HGF、VEGF的表达,促进肝细胞的增生,发挥对急性肝衰竭大鼠的保护作用。