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生物柴油是一种清洁可替代绿色能源,己引起人们极大的关注。脂肪酶催化制备生物柴油,具有反应条件温和、无污染等优势,是生物柴油技术的发展方向。随着酶固定化方法的日臻完善,脂肪酶催化应用领域越来越广泛。脂肪酶表面展示技术集分离、纯化和固定化于一体,不仅可以提高脂肪酶的稳定性,而且还能降低酶固定化操作成本。为此,我们采用a凝集素Aga2作为锚定蛋白,以酿酒酵母为宿主菌,表面展示米根霉脂肪酶(ROL),构建全细胞催化剂,研究了全细胞催化剂的酶学特性,初步探讨了全细胞催化剂的发酵成本,以及在生物柴油中的应用。主要研究成果如下：1.借助生物信息学方法,确定了锚定蛋白、宿主菌和目的脂肪酶蛋白表面展示单元的匹配规律,为表面展示全细胞催化剂的构建奠定了理论基础。分析4种不同种类的脂肪酶和锚定蛋白结构信息,其中ROL为目标展示酶时,结构中具有分布较均匀的疏水性和柔性；催化三联体由S242,D301,H354组成,阴离子氧洞为T213,L267,活性中心离C端较近。因此,选择N端锚定的a凝集素Aga2-Agal比较合适。2.以a凝集素Aga2-Agal为锚定蛋白,成功地将ROL展示在酿酒细胞表面,获得了具有水解橄榄油活性的全细胞催化剂。该全细胞催化剂水解橄榄油活力为78.9 U·g-1,高于相关文献报道。同时,研究了ROL全细胞催化剂的酶学特性,最适温度为40 C,最适pH为7.5,具有良好的稳定性和有机溶剂耐受性。3.初步探讨了ROL全细胞催化剂发酵生产成本和催化生物柴油应用。结果表明,2L发酵菌丝体生物量大于3g,粗略计算,发酵成本为68.9元g-1。海藻酸钠固定化ROL全细胞催化剂催化制备生物柴油得率为81.2%,重复利用7批次后的转酯率仍保持80%以上