DNA双键断裂修复对鼻咽癌放射存活细胞放射抗拒的影响及姜黄素的放射增敏

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目的: 鼻咽癌放疗后的存活细胞放射抗性增加,是引起鼻咽癌复发和转移的基础。DNA双键断裂损伤是最严重的DNA损伤,对肿瘤的发生发展有重要影响,而Ku70和DNA-PKcs是DNA依赖蛋白激酶(DNA-dependent protein kinase,DNA-PK)的两个重要亚基。本实验探讨Ku70及DNA-PKcs表达对鼻咽癌发生发展及放疗后复发的影响:观察鼻咽癌细胞的自发性凋亡及放射诱导凋亡、Ku70及DNA-PKcs表达及其与放射敏感性的关系;探讨姜黄素及放疗联合姜黄素对放射抗拒细胞的Ku70和DNA-PKcs表达及对其放射敏感性的影响,寻找以DNA双键断裂修复基因为靶点的放射增敏方法。 方法: 采用免疫组化SP法检测33例放疗后复发鼻咽癌、31例鼻咽非角化性癌、30例鼻咽粘膜慢性炎中Ku70、DNA-PKcs的表达。对CNE-2Z、Tr12细胞采用MTT法绘制生长曲线;平板克隆形成实验绘制细胞存活曲线。流式细胞术、Hoechst33342/PI双荧光活染法检测CNE-2Z和Tr12的自发性凋亡及放射诱导凋亡的情况;RT-PCR检测不同时间点和不同剂量射线处理后的CNE-2Z和Tr12的Ku70及DNA-PKcs mRNA的表达。MTT法筛选姜黄素药物浓度,免疫细胞化学检测不同浓度姜黄素对Tr12细胞Ku70及DNA-PKcs表达的影响,平板克隆形成实验检测低浓度姜黄素对Tr12细胞的放射增敏作用。微核实验检测姜黄素及放疗联合姜黄素对Tr12细胞DNA双键断裂修复的影响。 [结论: (1)Tr12细胞与CNE-2Z细胞相比具有放射抗性。 (2)Ku70和DNA-PKcs可能参与鼻咽癌的发展过程。 (3)放射后存活细胞Tr12的放射抗性增加可能与DNA双键断裂修复相关蛋白的表达有关。 (4)低浓度姜黄素可提高鼻咽癌放射后存活细胞的放射敏感性,可能与Ku70、DNA-PKcs表达水平降低有关。
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