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目的:
鼻咽癌放疗后的存活细胞放射抗性增加,是引起鼻咽癌复发和转移的基础。DNA双键断裂损伤是最严重的DNA损伤,对肿瘤的发生发展有重要影响,而Ku70和DNA-PKcs是DNA依赖蛋白激酶(DNA-dependent protein kinase,DNA-PK)的两个重要亚基。本实验探讨Ku70及DNA-PKcs表达对鼻咽癌发生发展及放疗后复发的影响:观察鼻咽癌细胞的自发性凋亡及放射诱导凋亡、Ku70及DNA-PKcs表达及其与放射敏感性的关系;探讨姜黄素及放疗联合姜黄素对放射抗拒细胞的Ku70和DNA-PKcs表达及对其放射敏感性的影响,寻找以DNA双键断裂修复基因为靶点的放射增敏方法。
方法:
采用免疫组化SP法检测33例放疗后复发鼻咽癌、31例鼻咽非角化性癌、30例鼻咽粘膜慢性炎中Ku70、DNA-PKcs的表达。对CNE-2Z、Tr12细胞采用MTT法绘制生长曲线;平板克隆形成实验绘制细胞存活曲线。流式细胞术、Hoechst33342/PI双荧光活染法检测CNE-2Z和Tr12的自发性凋亡及放射诱导凋亡的情况;RT-PCR检测不同时间点和不同剂量射线处理后的CNE-2Z和Tr12的Ku70及DNA-PKcs mRNA的表达。MTT法筛选姜黄素药物浓度,免疫细胞化学检测不同浓度姜黄素对Tr12细胞Ku70及DNA-PKcs表达的影响,平板克隆形成实验检测低浓度姜黄素对Tr12细胞的放射增敏作用。微核实验检测姜黄素及放疗联合姜黄素对Tr12细胞DNA双键断裂修复的影响。
[结论:
(1)Tr12细胞与CNE-2Z细胞相比具有放射抗性。
(2)Ku70和DNA-PKcs可能参与鼻咽癌的发展过程。
(3)放射后存活细胞Tr12的放射抗性增加可能与DNA双键断裂修复相关蛋白的表达有关。
(4)低浓度姜黄素可提高鼻咽癌放射后存活细胞的放射敏感性,可能与Ku70、DNA-PKcs表达水平降低有关。