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目的:建立逆三相膜萃取生物碱(尼古丁及氧化槐果碱),利用高效液相色谱法(HPLC)和紫外-可见分光光度法(UV)对提取物尼古丁和氧化槐果碱进行定性定量分析。方法:1.聚四氟乙烯膜(PTFE)作为萃取膜,有机溶剂为氯仿,水相和有机相体积比2.5∶1,0.01mol/L硫酸作为酸相萃取剂,1.25mol/L氢氧化钠作为碱相萃取剂,流速6mL/min,萃取时间25min。2.在单因素试验的基础上,采用L16(45)正交试验进一步考察条件,水相和有机相体积比为1∶1,0.3mol/L盐酸作为酸相萃取剂,0.75mol/L氢氧化钠作为碱相萃取剂,流速6mL/min、萃取时间60min。由直观分析可知,选取盐酸浓度(A)、氢氧化钠浓度(B)、提取时间(C)、体积比(D)4个因素,设计每个因素选取4个水平时,最佳提取工艺为A2B3C4D1,以盐酸浓度影响最大。结果:1.最佳实验条件下,尼古丁在25min内萃取率达到99.07%;高效液相色谱法定性定量分析尼古丁时色谱柱为C18柱(259mm×4.6mm),流动相为甲醇-0.2%磷酸水溶液(10∶90),进样量为10μL,柱温25℃,检测波长261nm,回归方程:Y=34014X+225.23,(r=0.9995,n=6),0.01~0.35μg/m L范围内线性关系良好,精密度RSD为0.98%,稳定性RSD为1.16%,重复性RSD为0.67%,平均加样回收率为99.26%。伊犁、巴楚、山东、库车和和田等五种产地1g烟草叶中尼古丁含量分别为24.43mg、23.12mg、21.39mg、13.72mg和5.93mg,伊犁烟草叶中尼古丁含量最高;2.最佳条件下氧化槐果碱在60min内萃取率达到98.21%。高效液相色谱法测定条件:Shim-packVP-ODS色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇-0.2%磷酸水溶液(7∶93),梯度洗脱,流速1mL/min,进样量5μL,柱温30℃,检测波长221nm,在0.01~0.7mg/mL范围内线性关系良好,回归方程为Y=1610.90X-190.06,(r=0.9978,n=6),精密度RSD为0.93%,稳定性RSD为0.88%,重复性RSD为1.88%,平均回收率为97.35%。结论:1.通过逆三相膜循环萃取分离系统,萃取的尼古丁和氧化槐果碱纯度高、操作简单、有机溶剂消耗量低等特点,可用于其他生物碱、皂苷类和稀土金属离子的提取分离。