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目的了解云南省宿主动物和传播媒介蜱、特定人群蜱传回归热螺旋体的感染状况及基因多态性,为蜱传回归热螺旋体病的防控提供科学依据。方法1.使用抗凝血管和采血针采集家畜静脉血血样;采用夹夜法、笼夜法相结合的方法捕获小型兽类,无菌解剖采集小兽肝、肾、脾脏样本;采用布旗法采集游离蜱、体表搜集法采集动物体表寄生蜱;在初筛检测有线索的部分地区采集不明原因发热患者血液。2.采用血液/组织基因组DNA提取试剂盒对上述样本进行DNA提取,扩增回归热螺旋体16S r RNA基因(353bp)进行初筛检测,阳性者扩增16S r RNA接近全长1600bp、Fla(506bp)、glp Q(461bp)基因。将阳性扩增产物送测序公司进行测序,得到的序列登陆网站(http://www.ncbi.nlm.nih.gov)进行BLAST比对,并进行同源性分析、构建系统进化发育树进行遗传进化分析。3.采用SPSS18.0统计学软件对数据进行统计分析,统计描述采用频数和构成比,统计推进采用卡方检验。结果1样本采集情况:在云南省的15个县(市)采集到5种家畜动物(牛、羊、犬、马和驴)血液1836份(牛血575份,羊血866份,犬血346份,马血32份,驴血17份);在29个县(市)采集分属5目11科28属59种的小型兽类的脏器样本4120份;在12个县(市)采集分属5属13种蜱虫样本1354只进行单只检测,902只蜱和7份幼蜱41只母蜱产的卵分为260组进行病原体分离培养;在5个县(市)采集不明原因发热患者血样629份。2家畜动物检测结果:1836份家畜动物血液样本,初筛检出阳性46份,阳性率为2.51%。牛、羊、犬均有检出,马和驴未检出。牛、羊和犬中的阳性率分别为2.61%(15/575)、3.46%(30/866)和0.29%(1/346)。阳性主要分布在7个县(市):为兰坪10.34%(3/29)、盈江7.48%(8/107)、巍山5.56%(1/18)、腾冲3.96%(30/758)、德钦2.33%(1/43)、云龙2.00%(2/100)和香格里拉1.04%(1/96)。3小型兽类检测结果:29个调查县(市)采集的4120份、分属59种的小型兽类脏器样本,仅在1只卡氏小鼠和1只高山鼩鼱中检出阳性,卡氏小鼠来自勐海,高山鼩鼱来自贡山,两个县市检出回归热疏螺旋体的阳性率分别为0.57%(1/175)和0.15%(1/686)。4蜱虫检测结果:1354只蜱虫进行单只检测,检测阳性30只,阳性率为2.21%(30/1354)。阳性蜱有5种分别为尼泊尔血蜱、柯洛宁血蜱、微小扇头蜱、卵形硬蜱和镰形扇头蜱,阳性率分别为66.67%(6/9)、3.07%(5/163)、2.31%(12/518)、1.96%(6/306)和1.56%(1/64)。在7个县(市)中检出阳性,分别是永德县16.67%(1/6)、德钦县10%(7/70)、维西县2.87%(5/174)、腾冲市2.26%(9/398)、剑川县2.11%(6/284)、兰坪县1.32%(1/76)和耿马县0.54%(1/184)。主要分布在滇西北地区。分组培养的蜱中共检出阳性24份,分别是成蜱(22份)、若蜱(1份)、蜱卵(1份),均来自腾冲市。通过16Sr RNA基因(353bp)初筛检测,在一只母蜱及其所产的卵中检测到回归热螺旋体,其序列同源性为77.8%,但尚未分离到病原体。5人群检测结果:629份患者的血液初筛检出阳性7份,分别为剑川县1份、大理市2份、普洱市2份和腾冲市2份,但所得序列经BLAST同源性比对未成功,FLA基因、glp Q基因及16S r RNA基因全长检测均阴性。6宿主媒介感染/携带回归热螺旋体多样性分析:对检出的序列进行同源性比对、遗传进化分析、及其编码的氨基酸序列分析。结果表明,云南省宿主和媒介感染/携带的回归热螺旋体具有高度的基因多样性特征,分属两种,一种B.miyamotoi及一新的亚型;另一种与现有报道的回归热螺旋体差异较大,可能为一新种,暂命名为Borrelia dali。结论1云南省家畜、小型兽类宿主动物和媒介蜱存在回归热螺旋体感染。阳性率分别为家畜2.51%,小型兽类0.049%,蜱虫2.21%。家畜是回归热螺旋体的主要宿主动物,检出阳性的县市分布集中在滇西北地区。2云南省回归热螺旋体的宿主动物和媒介种类复杂多样。在3种家畜、2种小型兽类、5个蜱种均检出回归热螺旋体。3调查区域宿主和媒介感染/携带的回归热螺旋体具有较高的多样性特征。经多基因位点分析,检出的回归热螺旋体分属两种:B.miyamotoi及一个新的亚型和一新种,暂命名为B.dali.4云南省的部分县市可能为回归热螺旋体的疫源地。家畜和媒介蜱中检出的回归热螺旋体序列同源性达98～99%,这些地区可能存在宿主、媒介间病原体的传播链。