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用猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndromevirus，PRRSV）核衣壳蛋白基因（ORF7）的昆虫细胞表达产物BacN作为免疫原，腹腔注射免疫BALB／c小鼠：3周后腹腔注射等量抗原进行二次免疫：再过2周，加倍剂量腹腔注射进行加强免疫，3天后，取小鼠脾细胞和骨髓瘤细胞SP2／0-Ag-14进行融合。经间接ELISA进行杂交瘤筛选，共获得3株能针对PRRSV核衣壳蛋白的特异性单克隆抗体（简称单抗），分别命名为1F9、5A5和5H8，其亚类分别为IgG1、IgG2b、IgG2b；单抗腹水的间接ELISA效价分别为215、217、218：单抗腹水的间接免疫荧光（Indirect immunofluorescent assay，IIF）效价分别为216、216、215。IIF试验结果表明，这3株单抗仅与PRRSV发生特异性反应，与常见猪其它病毒如猪细小病毒、猪伪狂犬病毒、乙型脑炎病毒、猪瘟病毒、口蹄疫病毒、猪圆环病毒1型以及猪圆环病毒2型均无反应性。Western blot试验结果表明，单抗5A5针对PRRSVN蛋白线性表位，而单抗1F9和5H8可能针对PRRSV N蛋白的构象型表位，其具体表位还需进一步鉴定。由于N蛋白在PRRSV病毒粒子的蛋白成分中含量最多，且编码N蛋白的基因ORF7比较保守，因此这3株单抗的获得为PRRS提供了临床诊断试剂。 为了建立间接免疫荧光试验（IIF）用于PRRS的诊断，我们将8头3周龄仔猪分为3组。第一组2头，用PRRSV ATCC VR-2332和PCV2联合感染；第二组3头用PRRSV ATCC VR-2332株单独感染：第三组3头作为健康对照。在攻毒前分别耳缘静脉采血，用间接ELISA测其血清抗体：PRRSV+PCV2联合感染猪分别在感染后1周、3周剖杀，PRRSV单独感染猪和健康对照猪分别在感染后1周、2周和3周剖杀，剖杀后采集肺、脾、扁桃体和腹股沟淋巴结。血清抗体检测试验结果表明，8头猪在攻毒前均为PRRSV抗体阴性，而攻毒后2周、3周所测血清抗体均为阳性；从剖杀结果看，攻毒猪均有不同程度的病理变化：组织石蜡切片观察显微病变，结果PRRSV单独感染猪及PRRSV和PCV2联合感染猪均发生了扬州大学硕士学位论文间质性肺炎。综合以上试验结果，证明攻毒猪均已成功地感染了PRRSV ATCCVR-2332。nF试验结果表明，用所获得的3株单抗均检测到了攻毒猪肺、脾组织中的PRRSV抗原。 用所获得的3株单抗共检测了7头临床疑似PRRS的病死猪，灌洗肺脏得到肺泡巨噬细胞，进行nF试验，结果沫阳某猪场2头猪为阳性，其它均为阴性。为了进一步证实检测结果的可靠性，我们对沫阳两头阳性猪的肺组织进行了病毒分离，结果病料在盲传到第四代时在Marc一145细胞上产生了明显的细胞病变，用此第四代病毒培养物进行IIF检测，结果也为阳性，进一步证实了所获得的3株单抗检测临床样品结果的可靠性。