【摘 要】
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目的:具核梭杆菌（Fusobacterium nucleatum,F.n.）是近年来发现的一种能够引起和加重肠道炎症的肠道细菌,鼠李糖乳杆菌（Lactobacillus rhamnosus,L.r.）是一种具有多种用途的常用益生菌。自噬（autophagy）在维持肠上皮细胞生理和病理状态下的功能的重要因素之一,尤其是在肠上皮细胞对肠道菌群的反应中具有关键作用。本研究旨在探究鼠李糖乳杆菌对具核梭杆菌
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目的:具核梭杆菌（Fusobacterium nucleatum,F.n.）是近年来发现的一种能够引起和加重肠道炎症的肠道细菌,鼠李糖乳杆菌（Lactobacillus rhamnosus,L.r.）是一种具有多种用途的常用益生菌。自噬（autophagy）在维持肠上皮细胞生理和病理状态下的功能的重要因素之一,尤其是在肠上皮细胞对肠道菌群的反应中具有关键作用。本研究旨在探究鼠李糖乳杆菌对具核梭杆菌相关的结肠炎的影响,并在自噬方面探究其机制,为炎症性肠病的临床诊治提供新的思路。方法:（1）在体实验部分选用小鼠急性葡聚糖硫酸钠（Dextran Sulfate Sodium Salt,DSS）结肠炎模型并加入具核梭杆菌和鼠李糖乳杆菌作为干预手段,每日记录小鼠体重和症状情况,造模结束后收取结肠组织通过结肠长度和HE染色判断炎症程度;通过western blot和免疫组化（IHC）检测结肠自噬水平。（2）体外实验部分选用Caco2肠上皮细胞系,加入具核梭杆菌和鼠李糖乳杆菌上清液作为干预手段,通过RT-PCR和ELISA检测炎症因子IL-6,IL-8,TNF-α的表达;通过western blot检测自噬相关蛋白LC3B、p62以及自噬调控通路PI3K-AKT-m TOR的变化,通过透射电镜和转染m Cherry-GFP-LC3质粒后共聚焦显微镜观察自噬小体和自噬溶酶体。另外,在加入自噬抑制剂氯喹（CQ）和3-甲基腺嘌呤（3MA）干预后观察炎症因子变化情况以进一步明确自噬的作用。结果:（1）体重变化曲线表明F.n.+DSS组体重下降较DSS组更为明显（P<0.05）且F.n.+L.r.+DSS组体重较F.n.+DSS组有所增加（P<0.05）,结肠长度改变具有同样趋势（P<0.05）。HE染色组织学评分F.n.+DSS组显著低于DSS组且F.n.+L.r.+DSS组高于F.n.+DSS组（P值均小于0.05）。结肠组织RT-PCR结果表明结肠炎症因子表达F.n.+DSS组较DSS组显著增加且F.n.+L.r.+DSS组较F.n.+DSS组有所下降（P值均小于0.05）。结肠组织western blot和免疫组化检测表明F.n.+DSS组自噬相关蛋白LC3B和p62表达均较DSS组显著升高且高于F.n.+L.r.+DSS组（P值均小于0.05）。（2）F.n.干预后Caco2细胞表达炎症因子显著升高,而L.r.可降低F.n.导致的炎症因子表达（P值均小于0.05）。Western blot显示F.n.干预导致Caco2表达LC3B和p62蛋白增加,且PI3K-AKT-m TOR通路磷酸化激活增加,同样可被L.r.所减少（P值均小于0.05）。透射电镜和免疫荧光结果表明L.r.可增加自噬溶酶体的数量。另外,使用自噬抑制剂CQ和3MA后可增强F.n.所致炎症因子表达（P值均小于0.05）。结论:具核梭杆菌可通过抑制肠上皮细胞自噬加剧DSS结肠炎,而鼠李糖乳杆菌可以通过恢复肠上皮细胞自噬流改善具核梭杆菌所致结肠炎。因此,鼠李糖乳杆菌可以作为一种治疗具核梭杆菌相关肠道紊乱的新手段。
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