列当高效生防菌的筛选及其防治机理研究

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目的:寄生性杂草列当在新疆很多地区均有发生,给当地哈密瓜、加工番茄、向日葵、打瓜等重要经济作物造成严重损失。为了防治列当危害,筛选出对列当强致病的生防菌株并明确其防治机理,为列当的有效防治提供技术支持。  方法:本研究从新疆列当发生区采集地上部萎蔫、茎基部变色及自然死亡的列当病样进行了采集、分离和初步鉴定,为新疆列当生物防治提供菌种来源。通过离体接种、盆栽试验、小区试验和大田试验测定致病菌对列当的防治效果;并采用形态学和分子生物学方法对致病性较强的菌株进行了鉴定,并对其进行单因素筛选和发酵工艺优化的研究;对生防菌株毒素的提取和初步鉴定,采用了高效液相色谱法和气相色谱-质谱(GC-MS)方法分析,明确高效生防菌的除草活性物质。  结果:1、采集了1000株列当病样,通过分离共获得526个分离物。在526个分离物中,镰刀菌294个,占分离总数的55.89%;丝核菌153个,占29.09%;腐霉菌45个,占8.56%;其他34个,占6.46%。镰刀菌、丝核菌、腐霉菌是新疆地区列当的主要致病菌。经过离体接种得出引起列当的发病最强的是腐霉菌,其次是镰刀菌,最弱的是丝核菌。通过盆栽试验和小区试验结果分析得出8株致病性较强的致病菌,即4株腐霉菌HN4-0、HN2-0、HN12930B和FU-0和4株镰刀菌KS7-2、KS3-3、KT-10和BT1883c。其中腐霉菌HN4-0的致病力最强,HN2-0和FU-0次之,HN12930B的致病力相对较弱;镰刀菌KS7-2和KS3-3的致病力强,KT-10和BT1883c的致病力相对较弱。  2、通过3株腐霉菌的生物学特性、菌落形态特征及藏卵器、雄器和孢子囊的形态检测,并参照余永年编写对腐霉菌的描述初步确定菌株HN4-0和HN2-0为瓜果腐霉,FU-0为终极腐霉。通过4株镰刀菌的菌落形态、大小孢子形态及产孢方式、厚垣孢子的形态特征,并参照王拱辰的方法初步确定KS7-2和KS3-3为茄病镰孢,KT-10为尖孢镰孢,BT1883c为F.cerealis。并采用18SrDNA的ITS区序列分析,与形态学鉴定结果相同。  3、通过对生防菌株HN4-0进行单因素筛选和发酵工艺优化的研究,明确了其生长最适碳源是玉米粉,最适氮源是豆粕,最适培养温度是28℃,最适pH值范围为7.0。对生防菌株HN4-0毒素的提取和初步鉴定,采用了高效液相色谱法和气相色谱-质谱(GC-MS)方法分析,明确了HN4-0的除草活性物质为邻苯二甲酸二甲酯。通过对除草活性物质对列当抑制性的测定及最适稀释浓度的筛选,明确了生防菌HN4-0防治列当的机制。  结论:筛选出高效生防菌株腐霉菌HN4-0,通过形态学特征观察和18SrDNA分析鉴定其为瓜果腐霉Pythiumaphanidermatum。通过单因素筛选和发酵工艺优化,得出最适碳源(玉米粉)为35.31g/100mL,pH值为7.91,培养温度为28.11℃时,最大的发酵产量预测值达到1.377g/100mL。通过高效液相色谱法和气相色谱-质谱法分析生防菌HN4-0乙酸乙酯相提取液的除草活性物质为邻苯二甲酸二甲酯。
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