脊髓灰质炎病毒(Poliovirus,PV,简称脊灰)是引起脊髓灰质炎的病原体,主要是通过侵犯中枢神经系统,引发弛缓性肌肉麻痹。世界卫生组织(WHO)于1988年提出“到2000年全球消灭脊髓灰质炎”的决议后,全球广泛使用脊灰疫苗,脊髓灰质炎病例也减少了99%以上。目前,世界上除极少数国家偶有少量脊灰病例发生外,世界正处于彻底根除脊髓灰质炎的边缘,世界各国正在为实现全球无脊灰做出最后的努力。脊灰病毒抗体检测对于研究脊灰病毒流行病学监视、疫苗免疫效果评估和衍生型病例具有重要的意义,本论文拟用脊灰病毒Sabin株I型单克隆抗体研制检测人类血清中脊灰病毒抗体的试纸条,为临床诊断提供重要参考。复苏培养本实验室制备的抗脊灰病毒Sabin株Ⅰ型单克隆细胞株62-F5,细胞状态良好。用间接ELISA测定单克隆细胞上清效价为1:8,与此细胞冻存之前的效价一致,表明此单克隆细胞较稳定。用弗氏不完全佐剂对Balb/c雌鼠致敏,一周后,腹腔接种以上杂交瘤细胞,接种一周后开始密切观察小鼠生命体态。当小鼠腹部膨大,有紧绷感时,活体抽取腹水;若小鼠活力下降,体感温度降低,应及时处死小鼠收集腹水。腹水收集后,用辛酸-硫酸铵沉淀法纯化抗体,通过超滤浓缩后测得单抗浓度为15.364 mg/mL,Reduced SDS-PAGE与Non-reduced SDS-PAGE分析纯化后的单抗,结果表明:单抗纯度较高,重链约70 KDa,轻链约23 KDa;根据Non-reduced SDS-PAGE电泳图谱可知,此单抗分子量约800~900 KDa,此单抗类型可能为IgM。用间接Elisa测定浓缩后的单抗效价为1:51200。采用柠檬酸三钠还原法制备40 nm胶体金颗粒,用此胶体金标记单抗,再与脊灰Ⅰ型抗原结合,形成胶体金-抗体-抗原复合物,将此复合物固定在金标垫上;将NC膜黏附在PVC板中间位置,在T线处包被浓度为1mg/mL的鼠抗人IgG(2μg/cm);在C线处包被1mg/mL的羊抗鼠IgG(2μg/cm);将金标垫黏接在NC膜一端,重叠约2 mm;样品垫黏接在金标垫上,重叠约2 mm;吸水垫黏接在NC膜另一端,重叠约2 mm;最后将试纸条组装在塑料外壳中。该胶体金试纸条检测脊髓灰质炎病毒抗体标准阳性血清的敏感性为1:80;特异性检测显示对脊灰阳性为阳性结果,对甲型肝炎病毒抗体阳性血清、乙型肝炎病毒抗体阳性血清、麻疹病毒抗体阳性血清、脊灰病毒抗体阴性血清进行检测显示为阴性结果,说明该试纸条特异性良好。与PV-IgG ELISA检测符合率为86.7%。在4℃和室温条件下保存3个月,其灵敏度和特异性没有明显变化,该胶体金试纸条稳定性良好。本研究初步建立检测脊髓灰质炎病毒I型抗体胶体金试纸条,该研究为脊灰的流行病学研究以及快速大规模检测脊灰Ⅰ型疫苗免疫效果均具有重要意义。