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目的: 滋养细胞的生物学行为受到严格的时空调控,一旦其调控机制失调,就可能导致流产、子痫前期、胎儿生长受限、滋养细胞肿瘤等疾病的发生。目前已有研究表明,Lin28B高表达于胚胎干细胞,随细胞分化而逐渐低表达于分化细胞和成体组织,参与了机体的正常发育、体细胞的逆分化及肿瘤的发生、发展。本课题通过检测Lin28B在正常妊娠组织不同阶段的胎盘组织滋养细胞中的表达,分析Lin28B在不同妊娠阶段胎盘组织滋养细胞中的表达差异,从而探讨其在正常妊娠胎盘发育中的作用,为进一步研究滋养细胞生物学行为异常相关疾病的分子机制提供理论基础。 方法: 1.正常妊娠不同时段绒毛或胎盘组织滋养细胞中Lin28B基因mRNA表达水平初步研究 收集2012年7月至2013年3月于中国医科大学附属盛京医院妇产科门诊及病房就诊的74例正常孕妇的绒毛和胎盘组织,其中包括正常妊娠早期组(5周<孕周≤13周+6,n=31)、正常妊娠中期组(14≤孕周≤27周+6,n=13)和正常妊娠晚期组(28周≤孕周<41周,n=30)。应用RT-qPCR方法检测各组绒毛或胎盘组织中基因Lin28BmRNA的表达情况。统计结果以均数±标准差表示,应用SPSS17.0软件进行统计分析,多组均数间的比较用单因素方差分析(OneWay-ANOVA分析),认为P<0.05有统计学意义。 2.正常妊娠不同时段绒毛或胎盘组织中Lin28B蛋白表达研究 采用WesternBlot和免疫组化方法检测各组绒毛或胎盘组织滋养细胞中Lin28B蛋白的表达。采用免疫组化检测Lin28B在胎盘组织中的表达定位和水平。用QuantityOne软件测定WesternBlot条带灰度值,以均数±标准差表示灰度值,组间比较采用单因素方差分析(ANOVA);免疫组化用H检验、U检验、卡方检验。用spss17.0软件进行统计分析,认为P<0.05有统计学意义。 结果: 1、在不同妊娠时期的绒毛和胎盘组织滋养细胞中均可检测到Lin28BmRNA的表达,免疫组化显示Lin28B蛋白在合体滋养细胞和细胞滋养细胞均有表达,在细胞浆和细胞核中均可以检测到Lin28B的免疫信号。在合体滋养细胞胞浆中的表达明显强于细胞滋养层细胞,这种表达差异在妊娠早期绒毛组织中更为明显。 2.RT-qPCR显示Lin28BmRNA表达量在各组的有显著差异(P<0.05),孕早期组表达量明显低于孕中期和孕晚期组(P<0.05),孕中期组表达量明显高于孕晚期组(P<0.05)。对早孕期不同周数与Lin28BmRNA的表达量进行相关性分析,Lin28B的表达与孕周成正相关(R=0.343,P<0.05)。 3.免疫组化和WesternBlot显示不同妊娠时期绒毛组织或胎盘组织滋养细胞中Lin28B蛋白的表达有显著差异(P<0.05)。妊娠早期表达高于妊娠中期组,妊娠中期组的表达高于妊娠晚期组,随着孕周的增加,Lin28B的表达呈逐渐下降趋势。 结论: 本研究显示,在正常妊娠不同时期绒毛和胎盘组织中Lin28BmRNA及蛋白的表达有差异,并随着妊娠进展,其表达下降,提示Lin28B在正常妊娠进展过程中,可能参与了滋养细胞的正常增殖、分化和浸润和胎盘的发育过程,在妊娠的维持中起重要作用,为进一步研究滋养细胞生物学行为异常相关疾病的分子机制提供理论基础。