蔬菜地中芽孢杆菌的多功能及其多样性分析

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从聊城、寿光、临沂、章丘4个地区的西红柿、黄瓜、韭菜、白菜、大蒜、大葱等蔬菜地采集了120份土壤样品,从中共分离到947株芽孢杆菌菌株,通过平板直观筛选,发现具有固氮、解钾、解磷的芽孢杆菌共350株,其中同时具有固氮、解钾、解磷三种功能的菌株有104个。采用单一碳源方法,还从这些土壤样品中分离筛选到14株能够降解毒死蜱的芽孢杆菌,没有发现能够降解氧化乐果的菌株。实验表明,这些降解毒死蜱的菌株没有固氮、解钾、解磷功能。经过重复试验,从上述104株芽孢杆菌筛选出24株固氮、解钾、解磷三种功能都比较稳定、强的芽孢杆菌。采用全氮比色法、四苯硼钠比浊法和磷钒钼黄比色法,进一步对这些芽孢杆菌和两株对照菌P418、YKT41的固氮、解钾、解磷能力进行了定量测定,发现综合能力最好的菌株有6个,分别是SJ2-7、SJ3-7、SH5-6、SH6-1、LJ4-2和CS6-4,其中菌株CS6-4还具有植酸酶活性。另外,菌株SH5-4、SH6-3对串珠镰刀菌有明显的抑制作用,菌株SJ7-3、SJ2-3、SJ1-7对灰葡萄孢有明显的抑制作用。据生理生化特点,结合16S rDNA测序结果,对这6个菌株进行了种类鉴定,结果表明这6株菌都是巨大芽孢杆菌。以上结果说明,蔬菜地土壤中芽孢杆菌的生理功能具有明显多样性,但这些表现最好的菌株都是巨大芽孢杆菌。在进一步研究试验的基础上,这些菌株有开发为微生物肥料的潜在价值。本研究设计了对芽孢杆菌具有特异性的引物,采用巢式PCR技术扩增土壤样品中的特异性DNA片段,然后进行变性梯度凝胶电泳(DGGE)分析,发现这些土壤中的芽孢杆菌具有分子多样性。对分离筛选到的6株多功能性较好的芽孢杆菌DNA,以及其来源土样的DNA,分别进行巢式PCR-DGGE电泳,结果发现单菌株DNA的条带在相应土样中都有对应的条带,与分离筛选结果相符合。
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