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本实验以屠宰场猪卵巢为试验材料,研究了不同培养条件下卵丘细胞(CumulusCells,CCs)对卵母细胞体外成熟发育的影响。
成熟发育结果表明:卵丘细胞(CumulusCells,CCs)可以提高卵母细胞孤雌激活后的发育潜力。周围没有卵丘细胞包被的卵母细胞(DenudedOocytes,DOs)经成熟培养和孤雌激活后,囊胚率明显低于来自同类卵泡的卵丘-卵母细胞复合体(Cumulus-OocyteComplex,COCs)。而当DOs与分离的CCs(D+CCs)或者COCs(coDOs)共培养44h后,则会部分恢复发育潜力(p<0.01)。此外,在44h的IVM结束时,DOs组的成熟率明显低于COCs组(p<0.01),D+CCs组的成熟率可以部分增高,coDOs组的成熟率则可以提高到与COCs组相同的水平。进行GSH测定发现:经过与CCs或者COCs共培养后,单个存活卵子内的GSH含量与COCs组无差异,说明通过与两种不同类型的卵丘细胞共培养后,可以使卵母细胞完全的达到胞质成熟。
IVM过程中,向介质中加入不同浓度的半胱氨酸(Cysteine,Cys)时发现:在无Cys的介质中DOs、D+CCs、coDOs组的成熟率无差异,均显著低于COCs组(p<0.05),而加入一定量Cys后,除DOs组外,其他三个处理组的成熟率明显升高(p<0.05)。进行GSH测定发现:向介质中添加一定量Cys对于D+CCs组单个存活卵子内的GSH含量无影响(p>0.05),而对coDOs组的单个存活卵子内GSH含量则有显著提高(p<0.05)。
进行TUNEL细胞凋亡检测时发现:在正常培养条件下,无论DOs组还是COCs组均不会发生凋亡。而在含有活性氧簇的介质中培养44h后,DOs组卵母细胞在没有任何保护机制下,凋亡程度极其严重,COCs组凋亡程度则轻的多,但是卵丘细胞凋亡不管在数量上还是程度上都很严重。当加入了抗氧化类药物之后,DOs组卵母细胞凋亡程度明显降低,而COCs组卵母细胞凋亡程度增加,卵丘细胞的凋亡程度和数量均有所增加。