抗胃癌MGr1单链抗体和MGb2单域抗体的制备及活性检测

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将抗体用于肿瘤的诊治是医学研究的重要课题之一。鼠源性全抗体分子用于人体的主要障碍是容易引起人抗小鼠抗体反应和过敏反应,而人抗体的制备仍存在一些难以克服的困难。因此,有必要对鼠源性抗体进行改进以利于鼠源性抗体在人体内的应用。与亲本抗体相比,利用基因工程技术制备的单链抗体具有免疫原性弱、组织穿透性强、易于大量制备、遗传背景稳定并容易进行改造等优点,更适于在体内的应用。胃癌是我国发病率最高的恶性肿瘤。由于多药耐药性的产生,胃癌对化疗的敏感性较低,目前临床上尚无有效的解决方法。MGr1单克隆抗体可识别胃癌细胞耐药相关抗原,在体外实验中能部分逆转胃癌耐药细胞多药耐药性。为了获得MGr1单抗的遗传背景,促进其在体内实验及临床上的应用,我们克隆了MGr1 mAb的可变区基因,并制备了MGr1单链抗体ScFvGr1: (1)利用RT-PCR方法以MGr1杂交瘤细胞总RNA为模板扩增MGr1 mAb重链和轻链可变区基因(Gr1VH,Gr1VL),双脱氧链末端终止法对Gr1VH和Gr1VL进行测序,利用计算机软件推导Gr1VH和Gr1VL编码的氨基酸序列并进行同源性分析,结果表明,Gr1VH、Gr1VL均为新的抗体可变区基因。Gr1VH编码116个氨基酸残基,隶属小鼠免疫球蛋白重链Ⅱ(A)亚组,与小鼠免疫球蛋白重链可变区基因MMOLLVAR605具有较高的同源性(96%);Gr1VL编码116个氨基酸残基,隶属小鼠免疫球蛋白κ链第Ⅱ组,与小鼠单链抗体MMOLLU131195具有较高的同源性(91%)。
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