论文部分内容阅读
胆管癌是一种肝内或胆管上皮来源的恶性程度较高的肿瘤。由于其解剖和生理特点,早期诊断和临床治疗都较困难。多数患者出现症状时通常己经进入中晚期,已不适合手术切除。药物治疗对于不能手术切除的胆管癌患者具有重要意义。临床上常用的抗肿瘤药物多数具有较强的毒副作用,而且胆管癌对其不敏感,因此,寻找对胆管癌更敏感、有效的、毒副作用小的天然抗肿瘤药物,提高胆管癌药物治疗的疗效就变得更加重要。 七叶皂苷钠为五环三萜皂苷钠,是一种非甾体抗炎药,具有抗渗出及增加静脉张力、消肿、抗炎和改善血液循环等作用,已广泛应用于临床。近年来,七叶皂苷钠的抗肿瘤已得到重视并进行了不同程度的研究,但有关七叶皂苷钠抗胆管癌作用的研究很少。 本论文以体外培养的三株人胆管癌QBC939、Mz-Cha-1、Sk-Cha-1细胞为研究对象,分别探讨了β-七叶皂苷钠的抗肿瘤作用及作用机理。通过MTT法、细胞形态观察法、染色法、流式细胞术、阐明了β-七叶皂苷钠对胆管癌的增殖抑制、周期调控、诱导凋亡作用;使用DNA Ladder、RT-PCR、Western blot等方法全面探索了β-七叶皂苷钠诱导胆管癌凋亡可能的分子机制;并采用细胞粘附实验、划痕实验、Transwell侵袭实验研究了β-七叶皂苷钠对胆管癌细胞体外迁移、侵袭能力的改变。实验结果表明,β-七叶皂苷钠对于体外培养的胆管癌细胞的增殖抑制作用呈时间和剂量依赖性,与临床常用化疗药物5-Fu、VCR、CDDP相比,β-七叶皂苷钠对胆管癌的抑制效果较强。Mz-Cha-1细胞周期被阻滞在G0/G1期,而QBC939、Sk-Cha-1细胞周期被阻滞在G2/M期。β-七叶皂苷钠能引起ROS活性升高,线粒体膜电位的崩溃,并且能够激活Caspase-3的活性,引起胆管癌细胞的凋亡。该凋亡作用能够被Caspase的广谱抑制剂z-VAD-fmk抑制。抗凋亡蛋白Bcl-2表达降低,Bax和p53表达不变,以及ROS活性升高在该凋亡过程中发挥了重要作用。同时,β-七叶皂苷钠还可以抑制胆管癌细胞体外迁移和侵袭能力。总之,β-七叶皂苷钠对胆管癌的生长增殖有明显的的抑制作用,主要通过阻滞细胞周期、诱导细胞通过caspase依赖的线粒体途径凋亡、抑制细胞侵袭和迁移来发挥其抗肿瘤作用。