论文部分内容阅读
前言 肿瘤的发生、发展及转移多伴随基因的改变(癌基因的激活和抑癌基因的失活、突变等)。抑癌基因第10号染色体同源丢失性磷酸酶-张力蛋白基因(phoshatase and tensin homology deleted on chromosome ten,Pten)是1997年3月以来发现的,一些研究已经证明它与肿瘤的形成,尤其是肿瘤的进展有关。该基因先后被国际上三个科研小组分别克隆,因而有不同命名,是目前发现的第一个具有磷酸酶活性的抑癌基因。 Pten作为第一个具有磷酸酶活性的抑癌基因,自发现起就受到众多研究者的关注。Li和Steck等首先对为数不多的脑肿瘤、前列腺癌及乳腺癌细胞株和一些原发性肿瘤进行该基因的初步检测,均发现了不同形式的体细胞性突变(somatic mutation)。除了在各种肿瘤中发现体细胞性突变外,在一些家族遗传性疾病,如Cowden病和青少年结肠息肉瘤均发现了该基因不同位点的胚系突变(germline mutation)。有研究报道,Pten在其他原发肿瘤的杂合性丢失(LOH)发生率:肺癌为27%~50%、乳腺癌为48%、黑色素瘤为48%、头颈癌为41%、胰腺癌为37%、甲状腺癌为35%。Sano等发现Pten蛋白表达水平的高低与病人的病理分级及预后有关,病人的预后越差,恶性程度越高,Pten蛋白表达水平越低。本实验采用免疫组织化学方法系统研究Pten蛋白在肺腺癌、鳞癌中的表达状况,并探讨Pten蛋白表达与肺腺癌、鳞癌的恶性程度、有无淋巴结转移及淋巴结转移范围的相关性。 材料与方法 实验材料:收集中国医科大学第一临床学院胸科1995-2001年的87例肺癌手术标本,均经过病理确诊。其中肺腺癌42例、肺鳞癌45例。分化程度:高分化ZI例,中分化10例,低分化56例。淋巴结转移情况:N。23例,NI 17例,NZ 47例。并选取同期 20例肺良性病变(肺结核、支气管扩张症)手术标本。 主要仪器及试剂:英国产BRIGllT5040型切片机,格兰仕牌微波炉,OLYMPUS-BH。型显微镜,HLB.KI型烤片机,DRAGON.Hll010型水浴箱等。试剂:二抗(鼠抗人单克隆抗体)由 NeoMark-ers.USA公司提供。免疫组化染色试剂盒由北京中山生物技术有限公司提供。二抗工作浓度为三:50。**B显色试剂及其它常规试剂由中国医科大学胸科实验室提供。 实验方法 所有蜡块标本连续 5 urn切片,以肺良性病变组织(肺结核、支气管扩张症)作为阳性对照,省略二抗用PBS代替作为阴性对照。实验步骤:组织切片脱蜡一灭活一抗原修复一免疫组织化学染色一复染一脱水一封片。 结果判定 Pten蛋白表达为细胞浆着色,胞浆内出现棕黄色颗粒为Pen蛋白表达阳性。高倍镜下在每一切片随机取10个高倍视野,各计数100个肿瘤细胞中阳性细胞所占的比例。阴性反应(一人胞浆内无棕黄色颗粒出现;弱阳性表达(十户少于20%的细胞出现棕 ·2·黄色颗粒;阳性表达(+十卜多于或等于20%的细胞出现棕黄色颗粒。其中弱阳性表达(+)归人阴性反应(刁中。 统计学分析 应用四格表X‘检验方法和行X列资料的X‘检验方法分析。取P<0.05为差异有显著性统计学意义,p<0.of为差异有非常显著性统计学意义。 实验结果 1.87例肺腺癌、鳞癌中的Pten阳性表达率50.6%(44/87)明显低于 20例肺良性病变中的表达率 90%O00八 p<0.of八 2.肺腺癌、鳞癌中Pten蛋白表达率分别为61.9%p6/42X40.0%O8/45人组间有显著的统计学意义k<0.01人 3.高、中、低分化程度的肺腺癌、鳞癌中Pten蛋白表达率分别为 90.5%(19/20)、60.0啪(6/10)、33.9阮(19/56),经统计学分析,其组间存在非常显著的差异h<0.of人 4.肺腺癌、鳞癌淋巴结转移的N分期N卜N;J。中Pten蛋白表达率分另为78.l畅(18/27)、64.7%(11/17)、31.9啪(15/47),其组间有非常显著的差异h<0.0门。 讨 论 肿瘤的发生、发展及转移是一个涉及多方面、多因素、多阶段。复杂的演化过程。在这一过程中多伴随癌基因的激活和抑癌基因的失活、突变等,人们还发现一些肿瘤的发生、发展尚伴有第10号染色体的片段缺失。一种相对较新的抑癌基因Pten是1997年3月以来发现的,一些研究已经证明它与肿瘤的形成,尤其是肿瘤的进展有关。该基因先后被国际上三个科研小组分别克隆,因而有不同命名。由于该基因定位于第10号染色体上,其编码的蛋白与 ·3·磷酸酶和细胞质张力蛋白同源,并在许多肿瘤中伴有10号染色体的同源性丢失,故命名为第10号染色体同源丢失性磷酸酶一张力蛋白基因(phoshatase and tensin homcioology ddeted On ChoomSmeten,Pen人 Steck等发现在许多进展晚期的肿瘤有该基因的突变,因而命名为多发性进展期癌突变基因(mutated in mulhple admcecancer,MMACI人由于上皮细胞中该基因的表达在