手足口病是一类主要由小RNA病毒科肠道病毒属病毒引起的传染病,主要感染对象是婴幼儿,Enterovirus71(EV71)与Coxsackievirus A16(CVA16)是引起手足口病的两个最主要病原体。在2009年1月至2011年5月期间,我国发现的由EV71流行引起的感染病例超过了200万,其中约有1000人死亡。并且EV71的感染者常常会产生神经系统疾病,而CVA16导致的手足口病则不会有严重的并发症。所以,针对EV71的研究备受人们关注。　　 EV71病毒为单股正链RNA病毒,基因组约有7.5kb。该基因组编码一个约250kDa的多聚蛋白,这个多聚蛋白被自身产生的2A蛋白酶(2Apro)和3C蛋白酶(3Cpro)切割,产生11个成熟的结构蛋白和非结构蛋白。其中以RNA为模板的RNA聚合酶(RNA dependent RNA polymerase,RdRp),即水解后所产生的3Dpol,主要负责病毒的复制,是抗病毒药物设计的主要靶点之一。　　 解析出3Dpol的结构,再根据结构特征筛选出特异性的抑制剂,对防治手足口病具有重要意义。我们将3Dpol构建在了实验室改造的含有TEV蛋白酶酶切位点的pGEX-4T-1上来表达蛋白,并通过GST亲和层析、离子交换和分子筛纯化获得了较纯的蛋白。在筛选了大约1800个结晶条件并对有效条件进行了进一步优化后,获得了衍射结果较好的蛋白晶体。通过在上海同步辐射光源(SSRF)的衍射实验,我们获得的3Dpokl分辨率达到了2.4(A)。这对基于结构的药物设计筛选抗EV71药物具有重要意义。