羊肉生产中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的耐药性和散播研究

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耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)是肉类生产链中的重要致病菌,并且大量存在于养殖环境中,可通过食物链感染人类,造成严重的公共卫生问题。本研究以山西某育肥羊场及其定点屠宰车间为试验地,以5%的绵羊血琼脂培养基为采样基质,分别采集羊舍内、舍外空气,圈舍围栏、用具、羊鼻腔及粪土饲料,屠宰车间内空气、屠宰用具、宰后羊胴体、屠宰人员鼻腔及屠宰车间污水。通过细菌分离、培养、16S r DNA鉴定、苯唑西林和头孢西丁药敏纸片法及mec A基因扩增检测筛选MRSA,并测定其对14种抗生素的药物敏感性,利用ERIC-PCR指纹图谱及mec A基因序列对比生产环节中MRSA的遗传相似性,探讨羊肉生产中各环节MRSA的耐药情况及散播分布方式,结果显示:(1)在养殖、屠宰各环节采集样品752份,分离鉴定金黄色葡萄球菌160株,分离率为21.28%;其中羊舍内样本分离率为29.69%;屠宰环节中共分离菌株48株,分离率为14.68%;宰后羊胴体棉拭子培养物菌株分离率为25%。(2)依据K-B法和PCR方法,从160株金黄色葡萄球菌中筛选mec A阳性MRSA82株,检出率为51.25%;其中养殖场MRSA检出率为33.33%~64.29%,以羊舍内空气检出率最高;屠宰车间MRSA检出率为22%~66.67%,以污水和屠宰人员鼻腔检出率最高;羊胴体MRSA检出率为60.71%。(3)根据CLSI标准测定MRSA对14种抗生素的药物敏感性,各采样点MRSA对药物表现不同程度耐药性,其中对青霉素的耐药率最高,达到了98.78%,对复方新诺明、利福平、克林霉素、四环素、链霉素的耐药性为52.44%~84.15%,对庆大霉素、头孢噻肟和多西环素等其他药物的耐药率为19.51%~43.90%,对环丙沙星耐药率最低,仅7.32%,未发现耐万古霉素金黄色葡萄球菌。本次分离的MRSA多重耐药率达92.68%。羊舍、屠宰车间和羊肉中的MRSA对青霉素、头孢噻肟、环丙沙星、链霉素、复方新诺明和氯霉素等6类药物的耐药菌株比例存在相似的趋势。(4)通过ERIC-PCR扩增MRSA基因进行同源性分析,将其分为15个基因型,各菌株之间遗传相似系数高于75%,其中只有6株各为1个基因型,羊舍中MRSA为主要的流行克隆株;抽取部分菌株进行mec A基因测序,耐药基因相似性大于96%,各采样环节分离菌株耐药基因相似度较高,提示在羊肉生产过程中,MRSA以交叉方式进行散播。
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