本试验利用基因工程技术、转基因技术和体细胞克隆技术等方法,研究构建人CD46转基因表达载体,并利用该表达载体制备转基因五指山小型猪；对获得的转基因猪进行体外功能验证。得到了如下结果：1、利用基因捕获技术捕获人CD46基因起始调控序列,人工合成人CD46基因cDNA序列,二者重组拼接形成拼接载体,添加抗性标记基因获得本试验所需转基因表达载体；体外转染成纤维细胞获得较好的转基因表达。2、构建原代五指山小型猪成纤维细胞,利用电转技术对构建的成纤维细胞进行转基因载体的转染；48h后在培养液中添加嘌呤霉素进行筛选；对获得的阳性克隆点进行RT-PCR鉴定和FITC标记抗体染色。3、将筛选到的阳性克隆细胞进行体细胞核移植,并进行胚胎移植；共计移植胚胎数1260枚,移植受体6头,妊娠5头,分娩3头,产仔11头,经PCR和RT-PCR初步鉴定,10头为转基因阳性。4、采集转基因猪不同的组织器官进行免疫组化分析,结果表明所构建的CD46微小基因表达载体具有类似于人体内源性CD46的组织特异性表达模式。不同的组织表现出不同方式的染色,其中多管腔组织染色更明显,并且染色集中在上皮组织和血管内皮细胞。5、采集转基因猪主动脉血管和耳组织分别构建主动脉内皮细胞系和耳组织成纤维细胞,FITC标记抗体染色后,进行流式细胞仪分析显示,所获得的转基因猪内皮细胞表达出高水平的CD46,主动脉内皮细胞转基因表达水平高于耳成纤维细胞。6、对转基因猪主动脉内皮细胞进行人ABO血型血清补体介导的细胞毒性分析表明,CD46转基因猪内皮细胞受到了明显的保护作用；本研究同时观察到B血型血清补体介导的细胞死亡细胞比例要明显低于其它血型血清补体介导的细胞死亡。本研究为异种器官移植研究在小型猪品种上的应用提供了理论依据,将有效地促进在小型猪品种的基础上进行更多的异种器官移植研究,为国内异种移植研究提供研究素材。