MxIRT1的定位及信号肽和可变区缺失突变的克隆、功能分析

来源 :首都师范大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:bin52833093
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
本文首先通过PCR扩增的方法得到小金海棠MxIRT1去信号肽和可变区区域的亚克隆,并将其构建到不同营养缺陷筛选型的酵母表达载体,转化不同二价金属离子转运体的酵母突变株,通过营养缺陷筛选阳性转化子。运用酵母的异源互补法结合电感耦合等离子体质谱仪对不同载体转化的酵母细胞进行了体内各种离子含量的测定结果证实了MxIRT1能够转运二价金属阳离子,但转运效率不同。MxIRT1对于Cd有较强的转运能力;对Zn、Fe的吸收有一定作用;可以转运Ni、Co、Cu;而与Mn的转运作用不明显。同时可以证明,过量可被细胞吸收的重金属离子都对其有一定的毒害,只是细胞的吸收量和可承受量因金属离子不同而有所不同。Cd的毒害最严重,微量即可抑制细胞生长。通过对去信号肽和可变区的MxIRT1的研究表明,1)MxIRT1前端约105bp的信号肽序列,它的缺失推测会影响到蛋白的功能。2)存在于跨膜结构域Ⅲ、Ⅳ之间的富含组氨酸的可变区对于Zn、Fe的转运有一定作用。它的缺失导致酵母对Zn的吸收量有明显下降。对Fe的影响在吸收量和细胞生长状态上也比较明显。而Cd、Co、Ni的转运只受到较弱的影响。根据结构预测MxIRT1是一种膜蛋白,为进一步确认它的亚细胞定位,利用构建好的诱导型酵母表达载体pYES2.0-MxIRT1∷GFP,通过GFP与活细胞荧光膜染料FM4-64结合的方法在荧光显微镜和共聚焦激光显微镜下观察。初步推断:MxIRT1定位在质膜上;并且其在质膜上的分布不是均匀的,而呈现‘脂筏’结构;以半乳糖为碳源诱导表达发现其最适观察时间在6-20hr之间。利用构建好的正、反义植物表达载体侵染烟草,已得到T0代的种子。
其他文献
为了更好地解决桥梁养护中出现的病害问题,减少施工成本,保障工程建设速度和工程建设质量。根据施工经验及相关文献质量对桥梁施工的养护现状以及施工常见问题进行总结。针对
喷油泵试验台是测试和调节喷油泵性能参数的设备.在总结分析目前国内喷油泵试验台的基础上,利用计算机和传感器技术对电子控制喷油泵试验台进行技术改进,介绍了微机控制喷油
摇臂式喷头副喷嘴的主要作用是增加喷头近处的喷水量,从而提高喷头的喷灌均匀度,因此对摇臂式喷头副喷嘴的研究具有重要意义。该文采用流场模拟和试验相结合的方法对摇臂式喷
目前,无锡高等职业院校专业结构的设置已经相对稳定成熟,门类也较为齐全。从目前高职院校毕业生就业结构来看,无锡市高职院校专业结构也存在着趋同现象,本课题通过对无锡高职
<正>随着出版产业的不断发展,"出版服务"作为新的业态正在我国崭露头角。实际上,类似这样的出版业态,在国际上已有多年的发展和比较成熟的经验,但在我国还属于成长中的新兴事
写作是学生学习英语的难点,是教师教学的重点。而中国大学生的英语水平普遍又不高,为了提高学生英语写作水平,教师应积极转变英语写作教学理念,在教学过程中充分发挥学生的主
北京市区域自动气象站中的温湿度传感器主要采用HMP45D和HMP155两种型号,为了对两种传感器观测一致性进行分析,文章抽取两种型号各2支在北京观象台进行对比观测试验。结果显
目的建立多维片类保健食品中维生素A含量测定方法。方法色谱柱:Phenomenex Luna silica(2)(250 mm×4.6mm,5μm),流动相:正己烷—异丙醇(99.7∶0.3),流速:1.0 m L·min-1,检
大学生网络道德教育是高校思想政治教育的重要内容,也是高校思想政治教育工作适应网络时代的必然要求。建立在辩证唯物主义和历史唯物主义基础上的马克思主义伦理思想为新时