近年来,猪蓝耳病疫情在全世界范围连续爆发,给全世界尤其是中国养猪业造成了巨大的经济损失,接种疫苗是控制和预防疫情的有效措施。目前该病疫苗种类包括减毒疫苗和灭活病毒疫苗,均以贴壁培养Marc-145细胞进行生产。已广泛应用于其他疫苗产品生产的无血清悬浮培养技术因其易于放大、过程易控、质量稳定等优势,正成为工业化生产疫苗的主要发展方向。然而,目前有关Marc-145细胞的无血清悬浮的研究较少且水平低下,并且细胞经无血清驯化后可能出现病毒扩增能力下降的问题。因此亟需开发可支持Marc-145细胞无血清悬浮培养和猪蓝耳病毒高效扩增的无血清培养基及工程细胞株。本文以Marc-145细胞和猪蓝耳病毒的扩增过程为研究对象。首先,将贴壁Marc-145 细胞转入 Celer-S001 无血清培养基中适应获得悬浮 Marc-145 细胞,其比生长速率为（0.25±0.06）day-1。在这基础上,通过混料实验和水解物添加实验,开发了支持Marc-145细胞快速扩增的无血清悬浮培养基SFM-2。该培养基支持的比生长速率为（0.51±0.03）day-1,最大活细胞密度可达（2.53±0.09）×106 cells/ml。其次,利用上述悬浮Marc-145细胞对悬浮培养接毒过程进行研究,初步建立了摇瓶转速为130 rpm、MOI=0.05和接毒密度为2×106 cells/ml悬浮接毒工艺,病毒产量为5.0 lgTCID50/ml。进而从病毒吸附效率、病毒受体表达水平、代谢水平三方探究了悬浮Marc-145细胞和贴壁Marc-145细胞病毒扩增能力差异的原因,发现贴壁Marc-145细胞在以上三个方面皆优于悬浮Marc-145细胞。在此基础上,通过有限稀释法和慢病毒转导技术成功构建了支持高效扩增猪蓝耳病毒的Marc-145工程细胞株。通过筛选、驯化获得的高产单克隆悬浮细胞株C11可获得的病毒产量达6.50 lgTCID50/ml,为原悬浮Marc-145细胞产量的38倍。通过慢病毒转导技术构建了 Marc-145-VIM和Marc-145-CD163重组细胞,其可获得的病毒产量分别达8.13 lgTCID50/ml和8.38 lgTCID50/ml,为原悬浮转贴壁Marc-145细胞的产量的17.7倍和31.6倍。通过本文的研究,成功实现了 Marc-145细胞的无血清悬浮培养,并建立了悬浮培养的接毒工艺,初步揭示了悬浮Marc-145细胞和贴壁Marc-145细胞产毒差异的原因。通过筛选和分子构建获得了高产悬浮单克隆株C11、重组细胞株Marc-145-VIM和Marc-145-CD163,为实现Marc-145细胞无血清悬浮培养高效生产猪蓝耳病毒疫苗奠定了基础,同时也为其他细胞株的无血清培养基开发和工程细胞构建提供了借鉴。