龙眼(Dimocarpus longan Lour.),属于无患子科(Sapindaceae)龙眼属,是我国较重要而有特色的一种亚热带木本果树,也是福建省主要种植的果树之一。本研究以‘四季蜜’龙眼花芽及叶芽为材料,运用cDNA-AFLP技术,分离龙眼成花相关基因片段,通过克隆测序,BLAST分析,获得了3个可能与龙眼成花相关的基因片段,还有待进一步克隆其基因全长,需要对时空表达情况展开研究,这将有利于揭示龙眼花芽形成过程中相关基因的作用机理。主要试验结果如下:1建立了适合‘四季蜜’龙眼花芽总RNA提取的技术体系本研究针对龙眼组织富含多糖、单宁、色素及酚类物质的特点,采用改良的SDS法和CTAB法进行龙眼花芽和叶芽总RNA的提取与纯化研究。结果表明,改良SDS法更适用于总RNA的提取,提取的RNA具有28s、18s两条清晰、完整的条带,且无降解发生;说明改良SDS法提取的总RNA具有较高的纯度,可以满足后续分子生物学研究的要求。研究确定了‘四季蜜’龙眼花芽、叶芽总RNA提取的技术体系:每1.00 g‘四季蜜’龙眼花芽或叶芽加入5.5 mL提取缓冲液,沉淀时间由3 h调整到10 h,可以得到高质量的RNA。2优化了cDNA-AFLP反应体系,分离‘四季蜜’龙眼成花过程的差异基因对cDNA-AFLP反应体系的关键因素进行探索,建立了重复性好的cDNA-AFLP分析体系。结果表明,EcoRI和MseI的组合在40μL体系中各取0.9μL可将ds-cDNA酶切完全,与相应接头连接过夜后产物直接用于预扩增。在25μL PCR反应体系中,预扩增产物稀释1200倍,Mg2+浓度1.6 mmol/L,dNTP浓度0.2 mmol/L,选扩的效果最佳。将测序效果好的32个TDFs序列在GenBank数据库中进行blastn、blastx比对,结果如下:差异片段上调表达28个,下调表达4个, 27个特意基因序列在数据库中搜索到相似性较高,有5个序列没有搜索到结果,推测为未知基因。分析显示27个TDFs中3个TDFs推测与‘四季蜜’龙眼成花相关,分别是引物组合E7M7扩增到的S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因,引物组合E7M4扩增到得细胞色素P450基因,引物组合M7E6扩增到的黄烷酮-3-羟化酶基因。3应用RT-PCR技术分离SAM基因3’端序列选取3个TDFs中一个可能与‘四季蜜’龙眼花芽形成相关基因片段SAM,设计引物,应用RT-PCR技术扩增其3’端序列,测序和拼接,获得SAM3’末端,共1253bp,与杨树SAM基因同源性达到96%。