【摘 要】
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多肽P(polypeptide-P)是存在于苦瓜种子中的由166个氨基酸组成的多肽类化合物,动物及临床试验表明其具有显著降血糖效果。研究者已从苦瓜中分离得到多肽P并测定得到其氨基酸
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多肽P(polypeptide-P)是存在于苦瓜种子中的由166个氨基酸组成的多肽类化合物,动物及临床试验表明其具有显著降血糖效果。研究者已从苦瓜中分离得到多肽P并测定得到其氨基酸序列,但未曾获得其基因序列信息。
本论文利用简并RT-PCR和染色体步移等技术,从苦瓜中克隆得到498bp成熟多肽P的编码序列,同源比对未发现同源性序列。成功构建了pET32a-polypeptideP原核表达载体,原核表达的重组多肽P经SDS-PAGE电泳分析,该重组多肽分子量约为44 kDa,且90％以上为上清表达。原核表达的多肽P经Ni-NTA亲和柱纯化后能得到单一条带,Western blotting进一步鉴定该蛋白即重组多肽P蛋白。纯化后的重组蛋白经四氧嘧啶诱导的糖尿病小鼠验证同样具有显著的降血糖效果(P<0.01),融合标签不影响目的蛋白的生物学功能。
通过对苦瓜降糖多肽P的基因克隆、原核表达、纯化和生物学功能鉴定证明了原核表达重组蛋白同样具有显著降血糖效果,为降血糖药物的开发及大规模生产提供理论基础。
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