大花蕙兰组培体系的建立及转耐寒基因ICE1的研究

来源 :黑龙江八一农垦大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:duokuo1
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大花蕙兰是近年来十分流行的花卉,有很高的商业价值。但因其传统栽培的周期长,常规分株繁殖率低等因素,很难满足规模化生产的需要。本试验通过探索大花蕙兰组织培养来加快其繁殖速度,提高繁殖系数,以解决市场供不应求的问题,也为工厂化生产提供技术依据。另外,由于大花蕙兰原产于热带和亚热带地区,喜欢温热的气候,而我国东北地区特别是黑龙江省冬季异常寒冷,这些气候条件给大花蕙兰的育种和栽培带来很大的局限性。因而研究并提高大花蕙兰的耐寒性具有重要的理论意义和现实意义。ICEl是一转录激活因子,在常温处于不活跃状态,当受到低温刺激后被激活,结合到无CRT/DRE的CBF基因的启动子上,诱导CBF表达,CBF转录因子再结合其下游一系列COR启动子的核心序列CRT/DRE元件上,使它们表达,进而提高植物抵抗胁迫环境的能力。本研究从拟南芥的RNA中克隆到ICEl,连上CaMV35S启动子构建成植物表达载体pCAMBIA1300-35S-ICEl-poly,通过农杆菌介导的方法转化大花蕙兰。经过抗性筛选、诱导生芽、诱导生苗、诱导生根等过程,获得了70多棵潮霉素抗性植株,PCR鉴定12.9%为阳性,且部分PCR阳性植株通过了Southern检测,确定为转基因植株。
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