甘蔗黑穗病拮抗细菌的分离筛选鉴定及拮抗机制的研究

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在甘蔗苗期、生长期,采集广西南宁市、北海市郊、横县良圻农场三地区的甘蔗地的土壤、健株和病株,从种蔗、叶、茎、芽(生长点)、根和土壤共54份样品中分离细菌菌株928株,经平板培养及几丁质培养基平板拮抗初筛试验有301株分离菌株对甘蔗黑穗病菌(Ustilago scitaminea Sydow)有拮抗作用。经对峙法培养法复筛,选出A34、A46、A61、A66、B6、B11、B14、B17、B24、B26、B30、B31、B37、B39、B42、B43、B91、B100共18个菌株作为防治甘蔗黑穗病的生防潜在因子,利用PCR技术进行拮抗机制的研究和初步鉴定。 经BiologGN微孔板鉴定结果为拮抗细菌B100为铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosa:B24为拟遗传不动杆菌Acinetobacter genospecies10;B30为布克氏茵Burkholderia cocovenens;B17为粘质沙雷氏菌Serratiamarcescens;有12株A34、A46、A61、A66、B14、B26、B31、B37、B39、B42、B43、B91初定为芽孢杆菌属Bacillus;B6、B)11属假单胞杆菌属Pseudomonas。 根据文献报道Bacillus subtilus与合成抗霉菌枯草杆菌素合成酶基因有关的序列为探针,设计特异性引物,利用PCR扩增方法对A34、A46、A61、A66、B14、B17、B24、B30、B37、B100和B3共10株生防潜在因子的拮抗机制进行研究,在A34、A46、A61、A66、B14、和B3菌株中克隆得到2.2kb左右的片段,并对拮抗细菌B3和A34的PGR产物进行测序。序列分析表明,该片段与专化合成脂肽类抗生素的基因ituB和mycB的片段具有很高的同源性,可推断出A34、A46、A61、A66、B14、B3的拮抗机制与产生脂肽类抗生素有关,存在优良的生防前景,值得进一步研究。
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