果蝇Encore基因生物学功能的初步研究

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在果蝇的卵子发生中,成胞囊母细胞经过四次有丝分裂,形成16个细胞的胞囊,其中的一个细胞分化成卵母细胞,而剩下的15个分化成滋养细胞。而在生殖细胞有丝分裂和卵母细胞的分化过程中起到至关重要作用的就是Encore。Encore突变体中,成胞囊母细胞会多进行一次有丝分裂,形成多细胞的胞囊。而具有促进细胞分裂能力的Bam在Encore突变体的表达范围是扩大的,但是对Encore和Bam之间的关系,却鲜有报道。本课题的重点就是探索Encore在卵子发生中有丝分裂的作用和Encore和Bam之间的关系。研究结果表明在果蝇S2细胞中,Encore能够促进Bam的泛素化。利用CRISPR/Cas9技术获得Encore ko果蝇表现出了多细胞的胞囊的表型。利用△2-3转座酶系统构建的Encore RNAi(shEncore)果蝇也表现出了相同的表型。shEncore和Encore ko果蝇的建立表明敲除Encore确实能够导致多细胞的胞囊产生,表明Encore对于果蝇卵子发生来说有着至关重要的作用。进一步研究发现,在shEncore果蝇卵巢中cycA、cycB、cycE表达量增高,Encore OE果蝇中cycA、cycB、cycE 的表达量降低,表明 Encore 通过调节 cycA、cycB、cycE 的表达量来控制细胞分裂。此外通过序列分析表明Encore具有相变的能力,通过体外构建的Encore-LC1和Encore-LC2原核表达载体纯化出的蛋白,分别在37.5mM、150mM的氯化钠盐浓度中展示出了相变的能力。综上所述,实验结果表明Encore对于果蝇卵子发生中的有丝分裂是十分重要的。已经有研究表明,Encore能够通过SCF复合体参与蛋白周期循环,主要是通过与Cull作用形成复合体,然后与泛素化的蛋白结合,降解相关蛋白。本课题的研究是对Encore促进卵子发生中有丝分裂机制的补充以及探索Encore在果蝇卵子发生中的新作用。希望本项研究成果对Encore蛋白的研究以及果蝇卵子发生研究有所帮助。
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