深绿木霉Trichoderma atroviride生物菌肥的研制及对油菜菌核病、根肿病的生物防治

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本文利用上海交通大学的深绿木霉(Trichoderma atroviride),REMI突变菌株H6作为供试菌株,进行了其固体发酵生产生物菌肥的基质配方及发酵条件的研究,进一步研究其对秸秆堆肥的腐熟工艺和对蔬菜的促生作用。同时还研究了该供试菌株对油菜菌核病(Sclerotinia sclerotiorum)、根肿病(Plasmodiophora brassicae)的生物防治的抑制机理和田间防效等。主要结果如下:1.深绿木霉(Trichoderma atroviride)REMI突变菌株H6菌肥基质成分及配置比例为:玉米渣:稻壳:稻草粉:麦麸=3:10:10:15,最佳含水量为50%,最佳接种量为20%,最适发酵温度为28℃,最适的发酵周期为7d。2.通过制作秸秆堆肥,从秸秆肥的团粒重、团粒直径、发酵色泽来看,4000mL水和秸秆与腐熟剂用量比为1:1的处理发酵效果较好。通过不同菌株的腐熟剂制备秸秆菌肥的配方筛选,深绿木霉(T.atroviride)REMI突变菌株H6菌肥作腐熟剂生产的秸秆堆肥腐熟效果最佳,能够有效降解水稻秸秆,其纤维素酶活性明显高于其他处理,CMC酶活性为3.48U.g-1,其他处理与对照差异不显著。各处理FPA酶活与对照相比差异均未达显著水平,HTK3处理FPA酶活力最高(1.13U.g-1)。H6处理的秸秆菌肥还原糖含量最高,为17.14mg.g-1,与对照相比差异达极显著水平,比对照高29.6%;各处理秸秆菌肥N、P的含量均高于对照,而钾的含量与对照相近。H6处理和HTK3处理的氮含量最高,为1.88%;H6处理的磷含量明显高于其他各处理,为5.9g.kg-1;各处理的钾含量差异不显著。在对蔬菜生长的促生作用方面,H6处理对番茄、黄瓜的株高、鲜重、干重的影响均高于对照。3.深绿木霉(T.atroviride)REMI突变菌株H6对油菜菌核病具有一定的生物防治潜力。在对峙培养中,深绿木霉H6对核盘菌不形成透明抑菌圈,培养96h后在两菌交界处可形成6mm左右的明显的黄褐色抑菌带。在这一抑菌带中核盘菌菌落畸形,生长受到明显抑制,其菌落的生长半径明显低于对照半径,木霉菌H6对核盘菌菌丝生长的抑制率为77.27%。木霉H6与核盘菌的菌落接触后可继续生长,能逐渐完全覆盖核盘菌菌落,形成了很宽的拮抗带,并产生了大量的分生孢子。木霉菌H6对核盘菌菌核的形成有抑制作用,可减少核盘菌菌落上菌核的重量和数量,重量减少率和数量减少率分别为79.45%和70.00%。显微镜下观察到深绿木霉菌株H6以缠绕或平行生长等方式寄生于核盘菌菌丝上,核盘菌菌丝生长受到限制,菌丝变形或扭曲,细胞质消解。木霉发酵代谢物对核盘菌菌丝生长具有明显抑制作用,过滤除菌发酵液与2PDA培养基以体积比1:1混合的处理R1的抑菌率最高,达到67.81%,过滤除菌发酵液处理R的抑菌率大于高压灭菌液处理R′的抑菌率。方法二中,深绿木霉菌H6的发酵代谢产物对核盘菌菌丝的生长具有一定的抑制率,达到61.36%,与方法-的结果接近。易挥发性代谢产物对核盘菌的抑制率没有发酵代谢物明显,抑制率仅为17.5%。木霉发酵滤液对核盘菌菌核萌发有抑制作用,培养48h、72h和96h后,用木霉发酵滤液浸泡处理的菌核萌发百分率分别为12%、70%和80%,菌核萌发较慢,萌发后产生的菌丝的生长受到一定程度的抑制。发酵滤液对核盘菌子囊孢子的萌发有抑制作用,发酵滤液原液对核盘菌子囊孢子萌发的抑制率达到59.34%。离体防效实验上,木霉菌H6孢子悬浮液对核盘菌在叶片上的侵染和扩展有较强的抑制作用,抑制率达到76.29%,并产生大量孢子,形成的病斑也比对照小。发酵滤液及其稀释液在离体叶片和茎杆实验中均有明显的抑制作用,最高抑制率分别达到73.64%和77.24%。大田防效实验中,木霉发酵代谢物的相对防效为76.28%,达到了多菌灵防效的80.41%;木霉菌肥的相对防效为63.24%,达到了多菌灵防效的66.67%,说明木霉菌肥有很大的应用开发前景。4.深绿木霉(T.atroviride)REMI突变菌株H6对根肿病具有一定的生物防治潜力。木霉发酵液对根肿休眠孢子萌发有明显的抑制作用。平均校正抑制孢子萌发率为68.4%。从田间防效上看,用木霉菌肥处理的田块发病率低、病情指数小,平均最高防治效果达到61.4%。
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