【目的】从Vero细胞中分离埃可病毒11型毒株,制备兔抗Echovirus 11-VP1、VP2、VP3和VP4结构蛋白多抗,进行Echovirus 11型病毒颗粒分子生物性状研究;将其作为疫苗候选株进行Balb/c小鼠体内免疫原性和免疫持久性的研究。纯化疫苗候选株病毒颗粒制备免疫原,制备鼠单克隆抗体、兔全病毒免疫多抗,建立双抗夹心ELISA抗原定量检测方法,为疫苗研发中抗原定量及质量控制打下基础。【方法】通过原核表达系统构建原核重组质粒,将纯化后的重组蛋白作为免疫原免疫家兔,制备兔抗Echovirus 11 4种结构蛋白多抗。在Vero细胞中分离获得Echovirus 11候选疫苗株,通过接种十层细胞工厂培养的Vero细胞获得病毒收获液,从收获液中纯化病毒颗粒,对其结构和组分进行分析,对其体液免疫原性及免疫持久性进行研究。纯化病毒颗粒作为免疫原,制备鼠单克隆抗体和兔全病毒多抗。对所得兔全病毒免疫多抗和鼠单抗进行HRP标记,分别作为包被抗体和检测抗体,以棋盘滴定法确定最佳的工作浓度后,建立双抗夹心ELISA方法,对其进行方法学验证,确定该方法的线性范围、准确度、精密度、特异性和稳定性。【结果】分别制备ELISA效价为1:10~6和1:10~8的兔全病毒免疫多抗及鼠腹水单抗。抗体均能特异性识别Echovirus 11型病毒抗原,与其它病毒无交叉反应。经检测单抗重链亚类为Ig G2b,轻链亚类为Ig K,识别VP1结构蛋白表位。对从Vero细胞中分离的疫苗候选株进行纯化,得到空心颗粒（EP）和实心颗粒（FP）,用SDS-PAGE及WB法对两种颗粒进行了组分及纯度分析,EP及FP颗粒蛋白组分与其它肠道病毒相似,EP由VP0、VP1和VP3构成,纯度为78%;FP由VP1、VP2、VP3和VP4构成,纯度为98%。对病毒颗粒进行免疫原性的研究,数据显示EP、FP和EP+FP免疫原性差别不具有统计学意义。建立了双抗夹心ELISA抗原定量检测方法,该方法的线性范围为4.0-16.0μg/m L,线性关系良好。高、中、低3个浓度样品准确度验证回收率在96.9%-107.5%之间。板内精密度验证CV分别为7.4%、3.6%、4.2%。板间精密度验证CV分别为11.6%、6.8%、4.6%。稳定性验证结果显示样品CV均小于3%,验证结果均符合《中国药典》要求。【结论】从Vero细胞中分离得到的Echo-11毒株,Balb/c小鼠免疫原性及免疫持久性研究表明能够作为灭活疫苗候选株,为后续针对Echovirus 11疫苗的研发提供了依据和指导经验。建立的抗原定量检测方法可应用于候选疫苗的抗原定量,对于抗原制备过程中不同阶段样品的抗原检测具有指导意义。