【摘 要】
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2013年3月,中国首次检测到人感染新型A型重组禽流感病毒（H7N9）,截至2019年4月3日,全国共确诊1568例人感染,其中615例死亡。而在2016年至2017年第五次人感染H7N9亚型禽流感疫情中,从被感染人身上分离到高致病性H7N9禽流感病毒（Highly pathogenic avian influenza,HPAI）,提示H7N9亚型禽流感病毒已从低致病性转为高致病性。综上,研制高致
【基金项目】
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国家自然科学基金（31830097、31672586、U1501212）； 广东省重点领域研发计划项目（2019B020218004）； 广东省自然科学基金项目（2015A030313422）； 国家肉鸡产业技术体系项目（nycytx-42）； 广
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2013年3月,中国首次检测到人感染新型A型重组禽流感病毒（H7N9）,截至2019年4月3日,全国共确诊1568例人感染,其中615例死亡。而在2016年至2017年第五次人感染H7N9亚型禽流感疫情中,从被感染人身上分离到高致病性H7N9禽流感病毒（Highly pathogenic avian influenza,HPAI）,提示H7N9亚型禽流感病毒已从低致病性转为高致病性。综上,研制高致病性H7N9亚型禽流感病毒单克隆抗体以实现对高致病性H7亚型禽流感的临床快速诊断有重大的意义。本研究中首先参考从Gen Bank和GISAID数据库中2013年以来所有的H7N9亚型流感病毒中的80株H7N9亚型流感病毒代表毒株,对本实验室分离鉴定并保存的8株H7N9亚型禽流感病毒进行了遗传演化分析,根据遗传演化分析的结果,从8株H7N9亚型禽流感病毒中筛选出代表性毒株HZ-3,以之为免疫原,免疫BALB/c小鼠,制备单克隆抗体,利用免疫过氧化物酶单层试验（immunoperoxidase monolayer assay,IPMA）方法对杂交瘤细胞进行筛选,经过3次亚克隆,最终筛选出6株稳定分泌抗H7亚型禽流感病毒单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞,分别命名为2E2C5、3C6D3、5D2C9、8H5A9、9F8E3和21B6F9。6株单抗的抗体亚类鉴定结果显示6株单抗均为Ig G;特异性鉴定结果显示6株单抗均不与其他亚型禽流感病毒发生交叉反应,有较好的特异性;广谱性鉴定结果显示2E2C5、3C6D3、8H5A9、9F8E3和21B6F9均能与其他H7N9亚型禽流感病毒反应,有较好的广谱性;效价鉴定结果显示,2E2C5、3C6D3 IPMA效价最高;Western-blot分析结果显示,2E2C5、3C6D3、9F8E3和21B6F9均针对H7N9亚型禽流感病毒的HA蛋白;血凝抑制性试验结果显示仅2E2C5、3C6D3、9F8E3和21B6F9有血凝抑制活性;中和试验结果显示,以上四株单抗同样具有广谱中和性。其余2株单抗均无血凝抑制活性和中和活性。本研究成功地制备出了针对H7N9亚型禽流感病毒HA蛋白的特异性的单克隆抗体,为建立H7N9亚型的禽流感的检测方法奠定了基础。
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