金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）是一种条件致病菌,能引起皮肤和多种脏器感染,严重者会引发败血症、脓毒症等危及生命的全身性感染。过去抗生素是治疗S.aureus感染的首选药物,但由于耐药菌株的大量出现与迅速蔓延,使抗生素治疗收效甚微。因此,疫苗研制得到了普遍的认可与重视。研究表明,S.aureus膜表面的锰转运蛋白C（manganese transport protein C,MntC）高度保守,且能诱导机体产生针对S.aureus和表皮葡萄球菌（Staphylococcus epidermidis）的免疫保护作用,是有潜力的疫苗候选抗原分子。研究证明,在宿主抵御S.aureus感染过程中,机体产生明显的体液与CD4⁺T细胞免疫应答,但有关MntC诱导机体产生的特异性抗体和CD4⁺T细胞免疫应答的免疫保护作用缺乏研究。本研究用PCR方法扩增S.aureus的mntc基因,并插入pET-28a原核表达载体,转化至感受态细胞BL21（DE3）中,经IPTG诱导表达MntC蛋白,将纯化后MntC蛋白与弗氏佐剂等体积配伍,以50μg/只的蛋白剂量于后腿部肌肉免疫接种BALB/c小鼠,21天后加强免疫,并以PBS与佐剂配伍作为对照。在加强免疫后2周分别用Newman、Wood 46和HLJ 23-1三株不同荚膜多糖血清型的S.aureus攻毒,MntC接种小鼠生存率均显著高于PBS接种小鼠。用间接ELISA和流式细胞术等方法分别对小鼠血清MntC特异性IgG水平及其亚型和细胞因子水平进行检测,结果MntC接种小鼠血清IgG水平明显增高,且主要为IgG1型;CD4⁺T细胞受抗原刺激后大量增殖,主要分化为Th1和Th17细胞,并分泌高水平IFN-γ和IL-17A。进一步通过血清调理吞噬、抗体中和及被动免疫实验证实,MntC特异性血清在体外能够显著增强巨噬细胞的吞噬活性,被动免疫血清能够有效清除小鼠血液和脏器的细菌,且与CD4⁺T细胞联合被动免疫效果更佳;当小鼠体内IFN-γ被抗体中和后不影响MntC诱导的保护作用,当IL-17被抗体中和后免疫保护作用下降,且过继转移Th17细胞的小鼠获得了明显的细菌清除能力。最后,我们通过生物信息学预测、蛋白质结构分析和细胞因子分泌量检测等方法,鉴定了诱导IL-17高表达的CD4⁺T细胞免疫优势表位₂₂₇27 KHKLKHLLVETSVDKKAMES₂₄₆。上述结果表明,MntC通过诱导小鼠产生特异性抗体和IL-17而发挥良好的抗S.aureus感染的免疫保护作用。