二甲双胍对结肠癌细胞SW480增殖、周期及凋亡的影响

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目的研究二甲双胍对人结肠癌细胞SW480增殖及周期的影响,诱导其凋亡的作用,初步探讨二甲双胍抗肿瘤的作用机制。方法1、体外培养人结肠癌细胞SW480,采用倒置相差显微镜观察二甲双胍对SW480细胞形态的影响。2、采用MTT法观察不同浓度的二甲双胍对SW480细胞增殖的影响。3、采用流式细胞术检测二甲双胍对SW480细胞周期分布和凋亡的影响。4、采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(实时荧光定量PCR)法检测二甲双胍对SW480细胞周期及凋亡相关基因CyclinD1,P27,Bcl-2,Bax and Caspase3mRNA表达的影响。结果1、倒置相差显微镜观察显示,与对照组相比,二甲双胍处理的SW480细胞,先发生皱缩、体积变小,随着二甲双胍浓度的增加贴壁细胞数目逐渐减少,细胞变圆数目逐渐增多,随后部分变圆细胞浮起。2、MTT比色法测定结果显示,1mmol/L、5mmol/L、10mmol/L、20mmol/L、40mmol/L二甲双胍处理SW480细胞24、48、72h后,均有明显的增殖抑制效应,呈时间-剂量依赖性。3、流式细胞术分析显示,20mmol/L二甲双胍干预SW480细胞48h,与对照组相比,细胞G0/G1期比例升高(P<0.05),S期比例降低(P<0.05),G2/M期比例也降低但差异无统计学意义(P>0.05);且细胞早期、晚期及总凋亡率均显著增高(P<0.01)。4、实时荧光定量PCR结果显示,细胞周期相关基因CyclinD1mRNA表达明显下调(P<0.01),P27mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05),细胞凋亡相关基因Bcl-2mRNA表达明显下调,Caspse3及Bax mRNA表达明显上调(P<0.01)。结论二甲双胍有抑制人结肠癌细胞SW480的增殖、G0/G1期细胞周期阻滞及诱导细胞凋亡的作用;其机制可能与上调及下调某些周期、凋亡相关基因的mRNA表达有关。
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